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XI CONGRESO NACIONAL DE BIOTECNOLOGÍA Y BIOINGENIERÍA
EVALUACIÓN POR CITOMETRÍA DE FLUJO DE ALGUNAS POBLACIONES
CELULARES PRESENTES EN BAZO, TIMO Y SANGRE DE RATONES DE LA
CEPA Balb/C INFECTADOS CON L2 DE Toxocara canis.
Flores Alatorre Hernández Leticia, Alba Hurtado Fernando y Reyes Esparza Jorge. Universidad
Tecnológica de Tecámac, Km 37.5 Carr Federal Mex - Pachuca, Ejido Sierra Hermosa, Tecámac,
Estado de México. (01) 55 59 38 84 05 Fax (01) 55 59 38 84 58, e-mail [email protected]
PALABRAS CLAVE: Toxocara canis, Linfocitos, Citometría de flujo.
ratones testigo definiendo que los datos fuera de
esta banda son significativamente diferentes, y los
datos de timo y bazo se sometieron al análisis de
varianza y prueba de Tukey.
Resultados y Discusión: Las larvas migrantes
modifican la respuesta inmune del hospedador. La
inoculación de hlTc modificó la proporción de
linfocitos CD4+ y CD8+ en sangre, induce un
aumento en el porcentaje de eosinófilos
sanguíneos. La proporción de linfocitos T en timo
aumentó en los animales sacrificados el día 3 pi y
en los sacrificados en días posteriores disminuyó
con respecto al grupo testigo. El aumento a los
tres días probablemente se deba a una respuesta
inespecífica, que por ser un órgano linfoide
primario no reacciona específicamente a los
antígenos, además muchos linfocitos salen del
mismo para llegar al lugar donde se encuentran las
larvas. Se detectó un aumento de los diferentes
tipos de linfocitos (CD3+, CD4+ CD8+ y CD19+)
en bazo entre los días 5 y 7 pi.
CONTROL
500
2500
RANGO SUPERIOR
RANGO INFERIOR
EOSINÓFILOS EN SANGRE
30.0
% DE
CÉLULAS
25.0
20.0
15.0
10.0
5.0
0.0
1
3
5
7
15
DÍAS POST-INOCULACIÓN
30
60
100
LINFOCITOS T CD3 EN TIMO
100.0
% DE CÉLULAS
Introducción. La Toxocariosis es una infestación
causada por el parásito helminto Toxocara canis,
su hospedador definitivo es el perro (Canis
familiaris) y tiene una amplia gama de
hospedadores paraténicos, el hombre es uno de
ellos provocando el Síndrome de Larva Migrans
Visceral El poco control y vagabundeo de los
perros causa la diseminación de esta enfermedad y
aumenta el riesgo de que el ser humano, sobre
todo niños, sean susceptibles, convirtiéndolo en
un grave problema de Salud Pública.
La infección experimental por larva 2 de T. canis
en ratones como modelo experimental, causa
variaciones en las poblaciones de linfocitos y
eosinófilos de sangre, timo y bazo, esta diferencia
es dependiente de la cantidad de larvas
inoculadas, por lo que se evaluó y comparó la
cinética celular, a diferentes tiempos con dos dosis
diferentes.
Metodología: Los huevos larvados de Toxocara
canis (hlTc) se obtuvieron del útero de hembras
del parásito localizados en el intestino delgado de
cachorros de entre 2 a 4 meses de edad,
sacrificados por sobredosis de anestesia
(Pentobarbital sódico). Para favorecer el larvado,
los huevos se colocaron en cajas petri en una
solución de formol al 2% en Solución Salina
Fisiológica (SSF) a 30°C hasta la formación de la
larva enquistada. Por vía intragástrica con sonda
tipo Foley, se inocularon 120 ratones cepa Balb/C
machos de 7 a 9 semanas de edad, divididos en 3
grupos, el grupo 1 con 48 animales se inocularon
con 2500 hlTc, el grupo 2 con 48 animales se
inoculó con 500 hlTc y el grupo 3 con 24
animales como grupo testigo. A diferentes
tiempos (1,3,5,7,15,30 y 60 días) posteriores a la
inoculación (pi) se sacrificaron 6 ratones de cada
grupo experimental y 3 del testigo, se obtuvo
sangre, timo y bazo de cada uno, se disgregaron
las células, se tiñeron con anticuerpos
monoclonales antiCD3+, antiCD4+, antiCD8+,
antiCD19+ para lifoncitos B y antiCD23+ para
eosinófilos.
Por citometría de flujo se contaron 10,000 células,
los datos de sangre se analizaron formando una
banda con dos veces la desviación estandar de 20
80.0
60.0
40.0
20.0
0.0
1
3
5
7
15
DÍAS POST-INOCULACIÓN
30
60
100
Fig 1. Se muestran los principales cambios que se
detectaron en las subpoblaciones leucocitarias.
Bibliografía: 1. Alba, HF. Evaluación de un
modelo de Toxocariasis ocular y sistémica
empleando jerbos (Meriones unguiculatus). Tesis
de doctorado, Facultad de Estudios Superiores
Cuautitlán. UNAM. (1999).
2. Quiroz RH. Parasitología y enfermedades
parasitarias de animales domésticos, México:
Editorial Limusa, 2000.
3. Reyes EJA. Apuntes de Citometría de Flujo,
México: Editada por Beckton Dikinson de
México, 1999.