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TOPOGRAFÍA Y CARÁCTER NEUROQUÍMICO DE LAS PROYECCIONES DEL ÁREA VENTRAL TEGMENTAL
AL NÚCLEO ACCUMBENS
Claudia Rodríguez-López1, Ana Simarro Díaz1, Nicolás Garzo Caldas1, Luisa Panadés Oliveira1, David Uriarte Pérez de Urabayen1, Antonio Martínez-Salio1, Lucía Prensa Sepúlveda2
1Servicio de Neurología, Hospital Universitario 12 de Octubre, Madrid
2Departamento de Anatomía, Histología y Neurociencia, Facultad de Medicina, Universidad Autónoma de Madrid
El núcleo accumbens (Acb) es el componente principal del
estriado ventral y consta de un área central (accumbens
core, AcbC) rodeada de una cáscara ventral (accumbens
shell, AcbSh). Entre sus funciones destaca la generación de
respuestas condicionadas según asociaciones estímuloresultado, de manera que el AcbSh media el refuerzo o
aversión condicionados y el AcbC se encarga del aspecto
motor del aprendizaje ligado a recompensa. Una de las
principales aferencias al Acb es el área tegmental ventral
(VTA), un núcleo situado en el suelo del mesencéfalo cuya
población mayoritaria son neuronas dopaminérgicas aunque
también alberga células gabaérgicas y glutamatérgicas. Se
distinguen varias subdivisiones dentro de VTA: 3 núcleos en
la línea media (rostral lineal [RLi], caudal lineal [CLi] e
interfascicular [IF]) y más lateralmente el área rostral de
VTA (rVTA), el núcleo paranigral (PN), el área parabraquial
pigmentada (PBP) y la cola tegmental ventral (VTT). Las
proyecciones de VTA al Acb conforman el sistema
mesoaccumbens, que pertenece al sistema mesolímbico, el
cual participa en el circuito de recompensa estando
implicado en patología neuropsiquiátrica como la adicción a
drogas, la esquizofrenia o la depresión mayor. Este trabajo
estudia las proyecciones desde las distintas subdivisiones
de VTA hacia los subnúcleos del Acb, para analizar si
existen patrones topográficos de inervación como se han
descrito en otros sistemas.
RESULTADOS
Poster
presentado
en:
INTRODUCCIÓN
FIGURA 1. A. Imagen de microscopía de fluorescencia que muestra la inyección del trazador
retrógrado Fast Blue en AcbSh. B. Corte sagital de prosencéfalo de ratón con tinción de Nissl sobre el
que se representa la localización de la inyección mostrada en A de acuerdo con el Atlas de Paxinos y
Franklin (2001).
FIGURA 3. A. Esquema coronal de la localización de las 6
inyecciones de trazadores retrógrados en AcbC y AcbSh. B.
Esquema coronal de la distribución de la población mayoritaria
de neuronas retrógradamente marcadas en las distintas
subdivisiones de VTA obtenida tras cada inyección. Se aprecia
que las subdivisiones mediales de VTA proyectan a regiones
mediales de Acb. Además, las neuronas localizadas
ventralmente en VTA inervan territorios dorsales en Acb y
viceversa.
‒ La subdivisión PBP alberga la mayor población de neuronas mesoaccumbens.
‒ Un 50% de las neuronas mesoaccumbens son dopaminérgicas.
‒ El sistema mesoaccumbens presenta un gradiente mediolateral y un gradiente dorsoventral inverso similar a la descrita en el sistema nigroestriado, sin una distribución específica en el eje anteroposterior.
‒ Los axones de las neuronas mesoaccumbens no colateralizan en otras estructuras y presentan un patrón de arborización muy amplio y denso en el Acb, de manera que una sola neurona de VTA proporciona inervación a un
gran número de neuronas en el Acb posibilitando la amplificación de la respuesta.
Claudia Rodríguez López
a65P
FIGURA 2. A. Imagen de microscopía confocal que muestra la inmunotinción para TH (rojo) y las neuronas
retrógradamente marcadas con Fast Blue en VTA (azul) obtenidas tras la inyección mostrada en la Figura 1.
FIGURA 4. A. Corte sagital de cerebro de ratón con inmunotinción para calbindina sobre el que se
B. Imagen de microscopía de confocal que muestra la colocalización de TH y Fast Blue es una neurona
representa la reconstrucción de una neurona mesoaccumbens infectada con el vector Sindbis-pal
retrógradamente marcada demostrando su carácter dopaminérgico. C. Corte sagital de mesencéfalo de
localizada en el CLi y cuyo axón arboriza profusamente en la región medial del AcbSh. B.
ratón con inmunohistoquímica para TH sobre el que se representa la ubicación de las neuronas
Representación en el plano coronal del campo terminal de axón representado en A sobre un corte
retrógradamente marcadas según el Atlas de Paxinos y Franklin (2001). D. Esquemas sagitales de niveles
de prosencéfalo de ratón con tinción de Nissl. C. Microfotografía del campo terminal del axón
mediolaterales sucesivos donde se representa la localización de las neuronas retrógradamente marcadas
marcado con el vector Sindbis-pal tras revelar con níquel-DAB.
obtenido tras el análisis de la inyección mostrada en la Figura 1. Los círculos indican neuronas
dopaminérgicas y los cuadrados neuronas no dopaminérgicas; en negro las neuronas del hemisferio
ipsilateral a la inyección y en azul las localizadas en el hemisferio contralateral.
CONCLUSIONES
68rasen
En ratones adultos C57/BL6 se inyectaron 6 depósitos de
los trazadores retrógrados fast blue y fluorogold en el AcbC
o en el AcbSh. Tras perfundir los animales a los 7 días, los
cerebros se cortaron sagitalmente en microtomo de
congelación a 60 mm, se realizó inmunofluorescencia para
tirosina hidroxilasa (TH) en los cortes que contenían
neuronas retrógradamente marcadas empleando un
anticuerpo primario monoclonal mouse anti-TH 1:1000
(Inmunostar) y un anticuerpo secundario goat anti-mousealexa fluor 568 1:200 (Molecular Probes) y se determinó la
colocalización mediante microscopía confocal (Espectral
Leica TCS SP5) así como la ubicación de las inyecciones y
de las neuronas marcadas en cada subdivisión del Acb y de
VTA respectivamente.
En otros dos ratones se inyectaron una media de 544
unidades infecciosas del vector viral Sindbis-pal-eGFP en
VTA. Tras perfundir los animales a las 48h, los cerebros se
cortaron sagitalmente en microtomo de congelación a 54-58
mm y se realizó inmunofluorescencia para tirosina
hidroxilasa (TH) en los cortes que contenían neuronas
infectadas con el mismo protocolo indicado más arriba para
determinar la colocalización mediante microscopía confocal.
Posteriormente se reveló la GFP utilizando un anticuerpo
primario policlonal rabbit anti-GFP 1:500 (Exbio) y un
anticuerpo secundario goat anti-rabbit biotinilado 1:100
(Sigma), y tras incubar en ABC Elite el tejido se reveló con
níquel-DAB por el método de glucosa oxidasa. Los axones
de 2 neuronas de proyección al Acb se reconstruyeron en
cámara clara a 20x para estudiar su patrón de
colateralización.
Neurología General P1
MATERIALES Y MÉTODOS