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La expresión de EZH2 determinada por
inmunohistoquímica no se correlaciona
con la presencia de mutaciones de EZH2
en linfomas de célula B grande (LDCBG)
M Garcia1, C Fernández-Rodriguez1, B Casado1, Mª T Baró,
A Puiggros1, M Salido1, A Salar2, B Espinet1, B Bellosillo1, S Serrano1
Servicios de Anatomía Patológica1 y Hematología2,
Hospital del Mar, Barcelona
INTRODUCCIÓN
• Los avances en las técnicas de secuenciación
han identificado alteraciones moleculares
involucradas en cáncer (mutaciones somáticas)
• Esto ha favorecido:
– mejorar los conocimientos de los mecanismos
de patogénesis,
– mejorar el tratamiento de estos enfermos
diseñando fármacos que específicamente
actúen sobre estas dianas (EGFR, BRAF)
INTRODUCCIÓN
• En el área de los procesos linfoproliferativos se
han descrito mutaciones puntuales recurrentes
con cambio de aminoácido (missense mutation)
en los aminoácidos Tyr 641 y Ala 677 del gen
EZH2:
– Morin et al. Nat Genet. 2010;42(2):181-185
– Ryan et al. PloS One. 2011;6(12):e28585
– McCabe et al. Proc atl Acad Sci USA.
2012;109(8):2989-94
EZH2
• EZH2 interviene en la regulación epigenética
• La epigenética consiste en la regulación de la
expresión génica mediante modificaciones
potencialmente reversibles que no afectan a la
secuencia del ADN pero si provocan una
modificación de la estructura de la cromatina
Cromatina= ADN empaquetado con proteínas
(histonas) formando nucleosomas
Principales modificaciones epigenéticas:
Acetilación
Metilación
Metilación
EZH2
• Forma parte de la familia del grupo Polycomb
(PcG): complejos proteicos con función represora
• Tri-metiltransferasa de histonas (H3K27me3)
• Compactación de la cromatina, e inhibición de la
transcripción de genes (múltiples dianas)
Modificado de Nature Genetics 42, 100–101 (2010)
EZH2
• Se requiere en el desarrollo temprano del
linfocito B, incluído el proceso de
reordenamiento de IgH, con descenso posterior
en su expresión
• De nuevo, su expresión se incrementa en los
CG, durante la reacción del CG y la transición
del linfocito al estado de centroblasto
INTRODUCCIÓN
• La mutaciones halladas en EZH2 en linfomas
afectan el dominio catalítico de la proteína:
– provocan un aumento de su función
(≈sobreexpresión)
– inhibición de la expresión génica, con
proliferación de la clona tumoral
• Líneas celulares (LDCBG), LF (7-22%) y
LDCBG-CG (14-22%)
INTRODUCCIÓN
• El mecanismo mutación-linfomagénesis es
desconocido, pero probablemente no se deba a
un incremento de su expresión
• En neoplasias sólidas como en próstata y
mama:
– no expresado en condiciones normales
– incremento de expresión se debe a una
inhibición del miRNA 101, que es un
regulador negativo de EZH2
OBJETIVOS
• Estudiar el perfil mutacional de EZH2 en una
serie de procesos linfoproliferativos B de tipo no
Hodgkin agresivos
• Correlacionar el resultado del perfil mutacional
con la expresión de la proteína EZH2 mediante
técnica inmunohistoquímica
MATERIAL Y MÉTODOS (I)
• N=111 casos de LDCBG:
– 61 tipo GCB
– 50 tipo ABC
• Estudio mutacional de EZH2 (N=111):
– ADN extraído de material tumoral parafinado
– Análisis mediante secuenciación Sanger de la
región codificante de los aminoácidos Tyr 641
y Ala 677 del gen EZH2
MATERIAL Y MÉTODOS (II)
• Estudio de expresión proteica de EZH2:
– N= 27 casos, 14 mutados y 13 no mutados
– clon SP129 (Ventana Medical Systems,
Tucson, AZ)
– Sistema Optiview HRP Multimer en un
Benchmark XT (Ventana Medical Systems)
RESULTADOS (I)
• De los 111 casos, 14 presentaban mutaciones
del gen EZH2 (12,6%):
– 11 de tipo GCB (18%)
– 3 de tipo ABC (6%)
• Todas las mutaciones en el aminoácido Tyr 641:
n=7*
n=3
n=2
n=1
n=1
Wild type
Y641N
TAC>AAC
Tyr (Y)→ Asn (N)
RESULTADOS (II)
• El estudio de expresión de EZH2 mediante
técnica inmunohistoquímica mostró positividad
en todos los casos analizados (n=27)
• No diferencias cualitativas ni cuantitativas en
relación con el estado mutacional del gen EZH2,
ni tampoco con el fenotipo de la célula tumoral
(GCB vs ABC)
EZH2 mut
ABC
GCB
EZH2 no mut
CONCLUSIONES
• El porcentaje de mutaciones de EZH2 es del
12,6%, más frecuentes en los LDCBG- GCB
(18%), pero presentes también en un pequeño
porcentaje de casos con patrón ABC (6%)
• Todas las mutaciones afectan al aminoácido
Y641, siendo el cambio más frecuente el de una
tirosina por una asparagina (Y641N n=7)
• No se han visto diferencias entre la expresión
proteica de EZH2 mediante técnica IHQ y el
estado mutacional de EZH2
CONCLUSIONES
• El porcentaje de mutaciones de EZH2 es del
12,6%, más frecuentes en los LDCBG- GCB
(18%), pero presentes también en un pequeño
porcentaje de casos con patrón ABC (6%)
• Todas las mutaciones afectan al aminoácido
Y641, siendo el cambio más frecuente el de una
tirosina por una asparagina (Y641N n=7)
• No se han visto diferencias entre la expresión
proteica de EZH2 mediante técnica IHQ y el
estado mutacional de EZH2
CONCLUSIONES
• El porcentaje de mutaciones de EZH2 es del
12,6%, más frecuentes en los LDCBG- GCB
(18%), pero presentes también en un pequeño
porcentaje de casos con patrón ABC (6%)
• Todas las mutaciones afectan al aminoácido
Y641, siendo el cambio más frecuente el de una
tirosina por una asparagina (Y641N n=7)
• No se han visto diferencias entre la expresión
proteica de EZH2 mediante técnica IHQ y el
estado mutacional de EZH2
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