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P 97 Título CARACTERIZACIÓN FUNCIONAL DE LAS MUTACIONES VAL333MET Y MET404VAL EN LA ENZIMA LECITINACOLESTEROL ACILTRANSFERASA (LCAT) PRESENTES EN UNA PACIENTE CHILENA CON HIPOALFALIPOPROTEINEMIA Autor Y Coautores Ricardo Rodríguez, Trinidad González, Rodrigo Cataldo, Susan V Smalley, Valentina Serrano, Attilio Rigotti, Antonio Arteaga, José Luis Santos Lugar De Trabajo Laboratorio de Nutrición y Genética; Departamento de Nutrición, Diabetes y Metabolismo, Facultad de Medicina Pontificia Universidad Católica de Chile Relator José Luis Santos Marin Contenido Introducción: La lecitina-colesterol aciltransferasa (LCAT) es una enzima plasmática encargada de la esterificación del colesterol en lipoproteínas de alta densidad (HDL), baja densidad (LDL). Mutaciones en el gen LCAT, se han relacionado con el déficit severo de esta enzima (FLD, “Familiar LCAT deficiency”) y el déficit parcial de LCAT (FED,“Fish-eye disease”). Ambas enfermedades se caracterizan por niveles de colesterol-HDL muy bajos y opacidad corneal. Dos variaciones genéticas c.997G>A (Val333Met) y c.1210A>G (Met404Val) fueron encontradas en una paciente chilena con claros síntomas de déficit severo de LCAT. Objetivo: Evaluar el efecto de las mutaciones Val333Met y Met404Val sobre la síntesis, secreción y actividad de LCAT. Sujetos y Métodos: Se evaluó una familia con un caso índice afectado de FLD de sexo femenino de edad adulta con opacidad corneal, anemia severa y proteinuria desarrollada durante el embarazo, que presentaba niveles plasmáticos de HDL-colesterol =3 mg/dL, LDL= 17 mg/dL, Trigliceridos=387 mg/dL y valores de contenido de colesterol ésteres anormalmente bajos. La secuenciación del genoma de esta paciente permitió identificar las mutaciones Val333Met y Met404Val en estado heterocigoto compuesto. Los familiares directos presentaron las mutaciones en estado de heterocigoto simple. Se realizó una reacción de mutagénesis sitio-dirigida para generar ambas mutaciones en el cDNA de LCAT inserto en el plasmido pCMV6-XL4, el cual fue transfectado en células HEK-293T para determinar el efecto de ambas mutaciones. La presencia de LCAT se verificó mediante inmuno blot y la actividad enzimatica se determinó mediante un test fluorimétrico. Resultados: los inmunoblot realizados en el lisado celular y el sobrenadante de estas células evidenciaron la presencia de la proteína, la cual tambien fue detectada en el plasma de la paciente. Se realizó un ensayo fluorimétrico de la actividad enzimática en los sobrenadantes celulares observándose una nula actividad en los cultivos transfectados con el vector con la mutante Val333Met y una disminución considerable de la actividad en aquellos transfectados con la mutante Met404Val. La actividad de LCAT en el plasma del caso índice entregó un valor indetectable, mientras que la actividad en los familiares en primer grado fue menor en comparación a un control sano. Conclusión: la presencia de las mutaciones Val333Met y Met404Val son responsables de la deficiencia severa de LCAT observada en el caso índice.
