Download XIII Jornadas Científicas de Biomedicina y Biotecnología

XIII Jornadas Científicas de Biomedicina y Biotecnología Molecular
XIII Biomedicine and Molecular Biotechnology Scientific Meetings
Genotipificación de virus de la Hepatitis C aislados de posibles donadores
de sangre que presentan infección oculta o infección activa.
1,2
1
1
Uribe-Noguez Luis Antonio ; Ribas-Aparicio Rosa María ; Cauich-Sánchez Patricia Isidra ; UribeNoguez Luis Octavio1,2; Jacques-Flores Verenice2; Martínez-Rodríguez María de la Luz2.
1
Laboratorio de Producción y Control de Biológicos, Departamento de Microbiología, Escuela
2
Nacional de Ciencias Biológicas, Instituto Politécnico Nacional. Unidad de Investigación Médica en
Inmunología e Infectología, Centro Médico Nacional “La Raza”, Instituto Mexicano del Seguro
Social.
Email: [email protected]
INTRODUCCIÓN
El virus de la hepatitis C (VHC) es la principal causa de hepatitis crónica, cirrosis y carcinoma
hepatocelular; afectando a 150 millones de personas alrededor del mundo. La gran variabilidad
genómica del VHC, se traduce en 7 genotipos y 67 subtipos. En el 2004 se describió una nueva
forma de infección denominada infección oculta por VHC (OHCV), caracterizada por no detectar
anticuerpos anti-VHC, pero en donde sí se puede detectar el RNA viral en hepatocitos o en
leucocitos de sangre periférica. Se desconoce si en la hepatitis C oculta, el VHC presenta los siete
genotipos que el VHC tiene en una infección activa. Por lo que el objetivo de este estudio fue
determinar los genotipos del VHC en casos de infección oculta y activa y analizar las similitudes y
diferencias entre ambas poblaciones virales.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se obtuvieron 499 muestras de sangre periférica de potenciales donadores del Banco de Sangre,
se les extrajo el plasma, el paquete celular por la técnica del MgCl 2. Las pruebas ELISA de 3era
generación, se realizaron en los Laboratorios Quest Diagnostics. Para el aislamiento de RNA a
partir de plasma se utilizó el kit “QIAmp Viral RNA Mini” y para células el kit “RNeasy”. Por RT-PCR
y PCR anidada a partir del cDNA se amplificó una región de la 5´UTR para la detección del VHC.
De las muestras positivas se realizó la secuenciación del amplificado y por medio de técnicas
bioinformáticas se realizó la identificación del genotipo viral.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Todas las muestras resultaron negativas a la detección de anti-VHC por ELISA de 3era generación.
El 11% de los sujetos fueron positivos en la detección del genoma del VHC, el 6% de los individuos
presentaron una infección activa y el 5% una infección oculta. Se identificaron los genotipos 1a y
2b en la infección oculta y el genotipo 1a en la infección activa. Sin embargo, dieciséis muestras no
fueron genotipificables por este método, lo que podría evidenciar un posible nuevo genotipo viral.
Debido a la gran importancia clínica de conocer el genotipo, hay una gran demanda para un
ensayo que sea rápido, fácil, rentable y sobre todo fiable. En este estudio las pruebas de ELISA
demostraron la falta de sensibilidad para detectar al VHC. Los genotipos identificados concuerdan
con los informados en la población mexicana; no obstante, se presentaron dieciséis muestras con
virus no genotipificables que mostraron polimorfismos conservados, lo que sugiere que se podría
tratar de un nuevo genotipo o subtipo viral del VHC, que deberá investigarse a mayor profundidad.
CONCLUSIONES
En conclusión las pruebas de ELISA de tercera generación no son lo suficientemente sensibles
para la detección del anti-VHC en plasma. Hubo coincidencias entre los genotipos del VHC
presentes en una infección oculta y en una activa; sin embargo, en dieciséis muestras se
presentaron polimorfismos en la región 5´UTR no antes reportados y que podrían tratarse de un
nuevo genotipo o subtipo del VHC relacionado más con la OHCV.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
I. Carreño V., Bartolomé J., Castillo I. & Quiroga A. (2011). Infección oculta por el virus de la
Hepatitis C. Enferm Infecc Microbiol Clin., 29(3), 14-19.
II. Koutsoudakis G., Forns X. & Pérez-del-Pulgar S. (2013). Biología molecular aplicada del virus
de la Hepatitis C. Gastroenterol Hepatol. (584), 1-14.
Unidad Profesional Lázaro Cárdenas, Prolongación de Carpio y Plan de Ayala s/n, Col. Santo Tomas C.P. 11340
Delegación Miguel Hidalgo México, D.F. | http://www.encb.ipn.mx/ | http://biomedbiotec.encb.ipn.mx/jornadas2015/