Download Construcción de una librería metagenómica de bacterias simbiontes

Construcción de una librería metagenómica de bacterias simbiontes del intestino
de insectos mantis.
Ramos Patlán, Francisco Daniel (1); Ortega Ávila, Rut (2); Del Rincón Castro, María
Cristina (3); Barboza Corona, José Eleazar (3); Salas Araiza, Manuel Dario (3);
Hernández Guzmán, Gustavo * (3). (1) Maestría en Biociencias, División de Ciencias de
la Vida (DICIVA); (2) Facultad de Agrobiología, Universidad Autónoma de Tlaxcala. Km
10.5 carretera San Martín Texmelucan S/N. Ixtlacuixtla, Tlaxcala. C.P: 90120. (3) Núcleo
Académico Básico, Posgrado en Biociencias, DICIVA-Campus Irapuato-Salamanca
(DICIVA-CIS), Universidad de Guanajuato.
Departamento de Alimentos, DICIVA-CIS, Universidad de Guanajuato. Km 9 ExHacienda El Copal, Irapuato, Guanajuato. C.P. 36500. [email protected]
INTRODUCCIÓN. La metagenómica estudia las comunidades microbianas presentes
en un ecosistema mediante metodologías independientes de cultivo. Se han descrito
diferentes metagenomas de intestinos de insectos y se han identificado bacterias con
actividades de celulasa, proteasa, lipasa, etc. Las cuales se han utilizado en diferentes
protocolos biotecnológicos. En este trabajo, presentamos a los insectos mantis como un
modelo para el estudio de interacción simbiótica entre las bacterias y su hospedero.
MATERIALES Y MÉTODOS. Se realizaron disecciones de insectos mantis (Stagmomantis limbata), recuperando el contenido intestinal y realizando preparaciones en fresco y de Gram para su observación al microscopio óptico. Se analizaron al menos 5
campos (40X y 100X). Se estandarizó la metodología para el aislamiento de DNA del intestino de mantis, posteriormente se realizó la amplificación por PCR (utilizando una
polimerasa de alta fidelidad) de una fracción del gen 16S ribosomal (un gen ampliamente utilizado en taxonomía molecular de bacterias); posteriormente se construyeron
dos librerías metagenómicas en un vector comercial. De ambas librerías se secuenciaron varias clonas y mediante un análisis informático, se realizaron comparaciones de su
secuencia contra bancos de datos públicos del NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) y del
Ribosomal Databank Project (https://rdp.cme.msu.edu/classifier/classifier.jsp), utilizando
el RDP Classifier Version 2.6 utilizando el 16S rRNA training set 9.
RESULTADOS. El contenido intestinal de mantis posee una abundante población bacteriana en la cual predominan las Gram negativas y en menor proporción bacterias Gram
positivas. Se evaluaron 3 protocolos para el aislamiento de DNA a partir de las muestras
colectadas del intestino de mantis y el mejor protocolo fue el que combina precipitación
diferencial de contaminantes y purificación de DNA en columna de sílica. Este protocolo
permite el aislamiento de DNA con calidad adecuada para su uso en PCR. Los fragmentos amplificados (1.5 kb aproximadamente) y secuenciados, muestran similitud a genes
ribosomales de bacterias Gram negativas, correspondiendo a las bacterias más abundantes en las muestras de intestino.
CONCLUSIONES. Se presenta un estudio preliminar donde se pretende obtener
conocimiento básico para describir a las comunidades bacterianas presentes en el intestino de insectos mantis, estudiar su funciones bioquímicas y planear estrategias para
clonar genes que puedan tener aplicaciones biotecnológicas interesantes.