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ÍNDICE I.- Introducción A) Descripción y estructura química de la AM 1.- Descripción 2.- Estructura química B) Características del gen de la AM 1.- Estructura del gen 2.- Regulación de la expresión C) Forma de actuación de la AM 1.- Mecanismos de acción 2.- Receptores para la AM D) Fisiología de la AM 1.- Vasodilatación y otras funciones cardiovasculares 2.- Broncodilatación 3.- Neurotransmisión 4.- Modulación de la función renal 5.- Acción antimicrobiana 6.- Regulación hormonal 7.- Reproducción E) Impacto de la AM en la salud humana 1.- Enfermedades cardiovasculares 2.- Cáncer 3.- Diabetes 4.- Enfermedades renales F) Colecciones de compuestos 1.- Colecciones de moléculas pequeñas 2.- Métodos de evaluación G) Objetivo del trabajo II.- Materiales y métodos A) Materiales 1.- Colección de moléculas pequeñas 2.- Líneas celulares 3.- Reactivos químicos e inmunológicos B) Métodos 1.- Métodos de búsqueda primaria en la colección combinatoria a) Ensayo mediante método radiactivo para la AM b) Ensayo mediante método colorimétrico para la AM c) Ensayo mediante método colorimétrico para el GRP 2.- Métodos de búsqueda secundaria (segundos mensajeros) a) Ensayo de cAMP para la AM b) Ensayo de 3H fosfatidil inositol para GRP c) Ensayo de Ca2+ intracelular para GRP 3.- Ensayos biológicos a) Ensayo de proliferación b) Estudio de formación de estructuras tubulares en matrigel c) Medida de tensión arterial en ratas 4.- Análisis estadísticos 1 3 3 3 3 8 8 10 12 12 13 15 15 16 16 17 18 19 22 22 22 23 29 30 31 32 34 38 39 40 40 41 42 43 43 43 44 45 45 45 47 48 48 48 49 49 50 III.- Resultados A) Optimización del método de búsqueda B) Búsqueda primaria 1.- Búsqueda primaria para AM 2.- Búsqueda primaria para GRP C) Búsqueda secundaria 1.- Búsqueda secundaria para AM mediante ensayo de cAMP 2.- Búsqueda secundaria para GRP mediante ensayo de mioinositol 3.- Búsqueda secundaria para GRP mediante ensayo de Ca2+ D) Ensayos biológicos 1.- Ensayo de proliferación en células tumorales 2.- Medida de tensión arterial en ratas 3.- Estudio de formación de estructuras tubulares en matrigel E) Resumen de los resultados 51 51 57 57 64 70 70 84 88 91 91 93 96 98 IV.- Discusión A) Planteamiento general B) Método de búsqueda C) Búsqueda primaria D) Búsqueda secundaria con la AM E) Posibles aplicaciones de los compuestos activos F) Estudio de la presión arterial G) Ensayo de proliferación celular H) Estudio comparativo de estructuras de los compuestos activos I) Evaluación de los compuestos con GRP J) Ensayo de formación de estructuras tubulares en matrigel K) Futuro 102 102 102 106 108 110 114 114 115 119 121 122 V.- Conclusiones 123 VI.- Bibliografía 124 2
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