Document related concepts
Transcript
Aislamiento, caracterización y selección de cepas nativas de Bacillus thuringiensis para el control de lepidóteros Responsable: Carmen Rossini Laboratorio de Ecología Química, Departamento de Biociencias, Facultad de Química Contraparte: BIOREND URUGUAY SRL Resumen del Informe final del proyecto Bacillus thuringiensis (Bt) es un microorganismo entomopatógeno utilizado como insecticida biológico. Esta bacteria se caracteriza por su capacidad de producir proteínas en inclusiones cristalinas durante la esporulación, las cuales resultan tóxicas para larvas de distintos insectos. Estas proteínas están codificadas en genes denominados cry. Las cepas de Bt pueden tener varios genes cry y expresar por lo tanto más de un tipo de proteínas, lo cual determina el espectro de su actividad. En diferentes países, se han desarrollado productos comerciales, que utilizan esta bacteria como principio activo. En nuestro país, en la actualidad, no se encuentran registradas formulaciones bioinsecticidas de este tipo. En este trabajo se realizó la búsqueda de cepas nativas de Bt en 110 muestras de suelos de diferentes zonas del país. La técnica de aislamiento se basó en el tratamiento de la muestra en solución de acetato de sodio, seguido de un calentamiento a 80°C para destruir microorganismos no esporulados y plaqueo en medio con polimixina y manitol. Las colonias obtenidas luego de incubación a 28°C durante 48 horas se examinaron microscópicamente en búsqueda de bastones Gram positivos esporulados cuya espora no deformara el cuerpo celular. Dichas colonias se reaislaron en medio no selectivo y luego se determinó su capacidad de producir hemólisis en agar sangre. Mediante características fenotípicas y con el uso de primers específicos se diferenció Bacillus thuringiensis de otras especies dentro del grupo de Bacillus cereus. La identificación se corroboró mediante la observación de cristales producidos en medio TSB. Se lograron aislar 37 cepas de Bt, de las cuales 27 presentaban el gen cry1 que codifica para proteínas con actividad contra lepidópteros. La actividad insecticida de las cepas se corroboró en larvas de Pseudaletia adultera.
