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ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD DE LA ENZIMA MALATO DESHIDROGENASA EN SEMEN PORCINO FRESCO Y CRIOPRESERVADO CON O SIN VITAMINA E Fuente: Satorre M, Dubois, D; Rodriguez, P; Breininger, E*. Trabajo extraído de Memorias del XI Congreso Nacional de Producción Porcina, Salta, Argentina de 2012 Cátedra de Química Biológica, INITRA, Chorroarín 280 CABA, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad de Buenos Aires. [email protected]. INTRODUCCIÓN El uso de semen porcino congelado puede aportar ciertas ventajas sobre el fresco o el refrigerado, como el transporte a largas distancias o la conservación durante períodos de tiempo prolongados. La sensibilidad del espermatozoide porcino al congelamiento representa el principal inconveniente en el establecimiento de un protocolo de congelación para esta especie. El efecto de los antioxidantes, como la vitamina E, protege la integridad de las membranas del espermatozoide, conservando la habilidad de generar energía oxidativa requerida para el mantenimiento de la movilidad y mejorando la calidad post-descongelamiento [1;2]. Existen pocos estudios que demuestran a un nivel bioquímico el perfil metabólico de las gametas porcinas y su relación con los parámetros de calidadespermática.Laenzimamalato deshidrogenasa (MDH) juega un papel central en el transporte de los equivalentes de reducción a través de la membrana mitocondrial a causa de la existenciadeisoenzimascitosólicasy mitocondriales. El objetivo de este trabajo fue estudiar la actividad de la enzima malato deshidrogenasa en semen porcino fresco y criopreservado con o sin el agregado de vitamina E. MATERIALES Y MÉTODOS La actividad de la enzima MDH se determinó espectrofotométricamente a 340 nm durante 1,5 minutos, a 37 °C, en extractos provenientes de espermatozoides frescos y criopreservados con o sin vitamina E. Las unidades enzimáticas se definieron como la cantidad de enzima MDH que cataliza la reducción de 1 µmol de NAD/minuto. Como parámetros espermáticos se evaluaron la vitalidad por la técnica de eosina/nigrosina, la movilidad por microscopía óptica en platina termostatizada, la criocapacitación por la técnica fluorescente de clorotetraciclina y la integridad acrosomal por microscopía DIC combinada con azul tripán. Los resultados se expresaron como promedio ±SD y fueron evaluados por el Análisis de Varianzas (ANOVA). El test de Bonferroni se utilizó como método post-ANOVA, en los casos en que se detectaron diferencias significativas entre las medias correspondientes a cada uno de los tratamientos. RESULTADOS Aunque el proceso de criopreservación mostró una tendencia a disminuir la actividad de MDH y el agregado de vitamina E pareció revertir parcialmente este efecto, el estudio de la actividad de la enzima demostró que no existen diferencias significativas en los valores de actividad de MDH en semen fresco o criopreservado con o sin vitamina E. Como se observó un significativo “efecto macho” en los resultados de parámetros espermáticos, los datos de actividad enzimática se re-evaluaron realizando un análisis de covarianza para bloquear este efecto. En función de este análisis, se observó que la actividad de MDH en 10semenfresco(13,4±5,9UE/10 espermatozoides) mostró diferencias significativas con los resultados de semen congelado. Sin embargo, si bien se observó un aumento de la actividad de MDH en aquellas muestras congeladas en presencia de vitamina E (10,1 ± 3,7 1010UE/10 espermatozoides vs. 8,2 ± 2,2 UE/10 espermatozoides), esta diferencia no fue significativa. DISCUSIÓN Si bien son necesarias nuevas experiencias que profundicen el estudio de la actividad de MDH, nuestros resultados demuestran que la actividad de la MDH es superior en semen fresco, disminuye con el proceso de criopreservación y esa disminución es parcialmente revertida con el agregado de vitamina E, indicando que este antioxidante ejercería un efecto protector que preserva la actividad de esta enzima. El hecho de que ya en semen fresco se observó una diferencia en la actividad de MDH en los diferentes animales, siendo significativamente menor en el verraco que muestra los parámetros más bajos postdescongelado, nos permite suponer que la actividad de la MDH sería un buen “predictor” de la congelabilidad del animal. BIBLIOGRAFÍA 1) Breininger E, Beorlegui NB, O'Flaherty CM, Beconi MT (2005) Alpha-tocopherol improves biochemical and dynamic parameters in cryopreserved boar semen. Theriogenology 63, 2126-2135. 2) Satorre MM, Breininger E, Beconi MT, Beorlegui NB (2007) α-Tocopherol modifies tyrosine phosphorylation and capacitation-like state of cryopreserved porcine sperm. Theriogenology 68, 958-965.
