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Curso de Fitopatología Departamento de Protección Vegetal Facultad de Agronomía Montevideo, 24 de noviembre de 2011 Ejercicios de teórico-práctico Resistencia genética Pregunta 1. Lea las siguientes definiciones de algunos conceptos importantes y conteste las preguntas. Resistencia genética es la capacidad inherente de determinados genotipos del huésped de limitar el crecimiento y/o desarrollo del patógeno en sus tejidos. O sea, habrá menor cantidad del patógeno en una planta resistente que en una susceptible. La resistencia puede ser total (cualitativa = hay / no hay enfermedad) cuando el huésped impide el establecimiento del patógeno o parcial (cuantitativa) cuando restringe el desarrollo del patógeno pero no lo impide. Tolerancia Se habla de tolerancia cuando, aunque el patógeno crece y se desarrolla en el huésped, los efectos negativos (intensidad de los síntomas, disminución del rendimiento) son menores. Evasión o escape Se refiere a la reducción en la probabilidad de contacto entre el patógeno y el órgano susceptible a la infección, generalmente resultado de la morfología o fenología de la planta. Resistencia inducida o resistencia adquirida Es un incremento de la resistencia en una planta en respuesta a un estímulo exterior (biótico o abiótico) que induce sus mecanismos de defensa. La respuesta puede ser local, o sea, solamente en el lugar donde se aplicó el estímulo, o sistémica, si la resistencia se da en toda la planta. Parte A. Los siguientes son ejemplos de los conceptos anteriores, ¿cuál corresponde a cada caso? a. La inoculación del virus del mosaico del tabaco en melón, el cual no es uno de sus huéspedes, hace que la planta sea, durante varios días, menos fácil de infectar con algunos de los patógenos que normalmente lo afectan. Entre estos patógenos hay hongos, bacterias y virus. b. Un cultivar de papa es infectado con un virus determinado, contiene el virus en sus tejidos en cantidades similares a los demás cultivares, pero sin embargo el enanismo que muestra no es tan marcado y la producción es mayor que la de plantas infectadas de otros cultivares. c. Un virus determinado infecta todos los cultivares de papa, sin embargo, cuando se realiza un test de ELISA con las hojas de plantas infectadas las que provienen de un cultivar en particular dan una coloración menor que las demás. A campo se observa que este cultivar crece mejor que las demás cuando existe alta presión de inóculo del virus en cuestión. d. Fusarium sp. infecta las espigas de cereales de invierno. Se considera que una importante vía de ingreso del hongo a la espiguilla es a través de las anteras. Un cultivar cuyas anteras están expuestas por menos tiempo tendrá menor incidencia de la enfermedad. e. Fusarium sp. infecta las espigas de cereales de invierno si se producen lluvias durante la floración. Un cultivar cuyo período de floración es más corto que el de los demás tendrá menor probabilidad de infección. f. Si se aplica ácido salicílico a una hoja de una planta unas horas antes de inocularla con un patógeno, se obtienen menos infecciones que si no se aplica. Este efecto perdura durante varios días luego de la aplicación. Parte B. Analice las ventajas y desventajas de: Resistencia genética Tolerancia Evasión o escape Resistencia inducida o resistencia adquirida Pregunta 2. Suponga que en una línea de investigación cooperativa internacional se estudia el comportamiento de tres cultivares de papa frente a dos de los principales virus del cultivo: PVY y PVX. Ambos producen síntomas de mosaico. El PVY es transmitido por pulgones en forma no persistente. El PVX no tiene vectores y es transmitido por contacto entre las plantas en el cultivo. Se estudió el comportamiento de las variedades A, B y C en dos zonas. Se plantaron 1000 tubérculos por cultivar en cada localidad y dentro de cada parcela se incorporó al azar 1% de tubérculos de un cultivar muy susceptible, infectados con ambos virus provenientes de la zona correspondiente. Los resultados obtenidos al final del cultivo se muestran en el cuadro siguiente. Localidad San José Mar del Plata Cultivar % de infección de plantas a la cosecha PVY PVX A 80 28 B 20 26 C 40 1 A 20 1 B 5 30 C 10 28 a. ¿Cuál/es de las variedades presentan resistencia a PVY? b. Dibuje una gráfica de la incidencia de PVY en función del cultivar. ¿Se puede decir que uno de los cultivares es más resistente a PVY? Fundamente su respuesta. c. ¿Cuál/es de las variedades presentan resistencia a PVX? d. Dibuje una gráfica de la incidencia de PVY en función del cultivar. ¿Se puede decir que uno de los cultivares es más resistente a PVX? Fundamente su respuesta. e. ¿En cuál de los casos existe interacción diferencial cultivar-raza? ¿En qué se basa para afirmarlo? f. ¿La respuesta frente a ambos virus es similar? Fundamente su respuesta. g. Analizando los resultados según las localidades, ¿para cuál de los virus se puede explicar la diferencia en comportamiento según la localidad por la presencia de diferentes razas en la población del patógeno? Fundamente. h. Para el otro virus, ¿a que puede deberse la diferencia en infección por PVY entre las localidades? Fundamente. Pregunta 3. Interacción huésped-patógeno Lea lo siguiente sobre la genética de la interacción huésped-patógeno y conteste las preguntas. En el patógeno, la patogenicidad se refiere a la capacidad de producir enfermedad en una o más especies de plantas, mientras que la virulencia se refiere a la capacidad de provocar enfermedad en determinados variedades de su huésped. En el patógeno se pueden diferenciar tres tipos de genes que participan activamente en el establecimiento de las interacciones patógeno-huésped. Un tipo se encuentra en bacterias fitopatógenas comprende genes que son absolutamente necesarios para el crecimiento del patógeno dentro de la planta, otro tipo, presente en hongos y bacterias, es necesario para provocar enfermedad en la especie huésped. El tercer tipo son los genes de virulencia, son necesarios para infectar determinados genotipos del huésped, los genotipos que poseen genes de resistencia. O sea, dentro de la ESPECIE PATÓGENA pueden existir RAZAS con diferentes VIRULENCIAS. Las razas son virulentas hacia determinados genes de resistencia. Teoría de gen por gen. Flor (1942) llegó a la conclusión que por cada gen determinante de resistencia en el huésped, existe un gen de virulencia correspondiente en el patógeno. Por ejemplo, en el patosistema que estudiaba (roya del lino) se encontraron 26 genes (alelos) de resistencia en el lino y 26 genes (alelos) de virulencia en la roya (Melampsora lini). Más recientemente se duda de la existencia de los alelos que confieren virulencia, al menos en algunos casos se ha visto que la raza virulenta carece de determinado gen. Actualmente se postula que la planta que tiene el alelo de resistencia (R) reconoce algo derivado del gen de avirulencia (Av) en el patógeno y esto desencadena la reacción de defensa. Entonces el proceso se puede esquematizar de la siguiente manera: Gen R en el huésped → Proteína R→ reconoce → → Proteína Av ← Gen Av en el patógeno Actualmente se reformula la teoría de Flor de la siguiente manera: Por cada gen de avirulencia en el patógeno existe un gen de resistencia en el huésped cuya interacción activa los mecanismos de defensa. Esto significa que un gen de resistencia sólo es efectivo si el patógeno que intenta infectar posee el correspondiente alelo de avirulencia. Los alelos de virulencia no activan resistencia en el huésped. Se ha determinado que esta interacción gen por gen existe en gran número de patosistemas, y que en la mayoría de los casos, la resistencia es el alelo dominante en el huésped y la avirulencia es dominante en el patógeno. a. Considere el caso de un cultivo huésped que posee un locus donde puede haber un alelo de resistencia (R- dominante) o de susceptibilidad (r r) y un patógeno diploide con su correspondiente locus de virulencia (av av) o avirulencia (Av - ). Analice cual sería el resultado de la interacción de entre cada uno de los posibles genotipos para el caso de que la resistencia sea cualitativa. (Se puede indicar el resultado como resistente o susceptible, poniendo énfasis en el cultivo, o como incompatible si no hay enfermedad o compatible si hay). Genotipos del huésped r r Genotipos del patógeno R- Av av av b. Suponga que se descubre que una especie emparentada al cultivo del item anterior es totalmente resistente al patógeno. Se incorpora el gen que confiere esta resistencia a ese cultivar del cultivo. ¿Cuál será el resultado de la interacción del patógeno con este nuevo cultivar cuando es liberado para la producción? ¿El resultado depende del genotipo al cual se incorpora el nuevo gen? c. De acuerdo al modelo de Flor de “gen x gen” indique el resultado (Resistente/Susceptible) de cada interacción en el cuadro siguiente. Imagine que se incorpora un nuevo gen de resistencia a estos genotipos y que el patógeno “adquiere” un tercer gen de virulencia que le permite vencer el nuevo gen de resistencia. Indique los genotipos del patógeno y del hospedante que resultarían en una reacción susceptible. Pregunta 4. Colletotrichum lindemutianum es un hongo que provoca manchas en todas las partes aéreas del poroto. Produce conidios que forman una masa gelatinosa sobre el acérvulo donde se originan. No tiene otro tipo de esporas. En un ensayo se probaron cuatro aislamientos del hongo provenientes del campo y 3 razas conocidas, inoculándolas en un set de variedades diferenciales usados internacionalmente para caracterizar las razas de este patógeno. Además se probaron dos variedades comerciales disponibles en el mercado. Los resultados se muestran en el siguiente cuadro, donde S = susceptible, R = resistente y - = no se probó. Aislamientos Razas conocidas Variedades diferenciales 1 2 3 4 α β Brasil A S R R R R S R B S R R R R R R C S R R R R S R D R R R R R R R E R S S S R R S F R R R R R R R G R R R R R R R H R S S S S R S Isabella S S S S R S - Pinto S S S S S S - Variedades comerciales a. Del análisis del cuadro, ¿qué conclusiones saca respecto a los aislamientos 1, 2, 3, y 4? Fundamente su respuesta. b. ¿Qué características del tipo de resistencia puede deducir del cuadro? Suponga que al año siguiente la composición de la población del patógeno consiste en 95% de la raza α y 5% de la β. En una chacra se planta la var. Isabella y en otra Pinto. c. Compare la cantidad de enfermedad que se podría esperar en los dos cultivares, a la semana de comenzada la epidemia y al final del cultivo (90 días después). Fundamente su respuesta. d. Las curvas epidémicas se diferenciarían en el parámetro .........................................