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ESTUDIOS IN VIVO CON LA BACTERIA PROBIÓTICA
Lactobacillus plantarum C4
Lactobacillus plantarum C4 es una cepa aislada de kéfir que ha mostrado
potencial probiótico, destacando su actividad antiinflamatoria, demostrada in
vitro sobre macrófagos e in vivo en un modelo de infección experimental en
ratón, y su capacidad inmunorrestauradora en ratones inmunocomprometidos.
Esta cepa es resistente a ciprofloxacino, lo que ha permitido diseñar un medio
selectivo y diferencial para ella, denominado LPSM. Esta cepa ha mostrado
ausencia de poder patógeno en ratones inmunocompetentes e
inmunocomprometidos, y en ensayos in vitro no se ha detectado transferencia
de resistencia a ciprofloxacino a bacterias sensibles de la microbiota intestinal o
enteropatógenas.
En este trabajo nos planteamos estudiar la posible actividad
inmunomoduladora de L. plantarum C4 en el ratón, mediante un ensayo ex
vivo, midiendo la capacidad de los esplenocitos para proliferar en respuesta a
mitógenos de células B y T. Adicionalmente, aprovechando la disponibilidad de
ratones a los que se administró C4 durante un periodo de tiempo prolongado,
examinamos la posible transferencia de resistencia in vivo desde esta cepa a
bacterias de la microbiota intestinal del ratón.
Se emplearon 10 ratones BALB/c, cinco de los cuales (grupo tratado) recibieron
una dosis diaria de 109 UFC/ml de C4 en leche descremada estéril por vía
intragástrica durante 18 días consecutivos. Los restantes (grupo testigo)
recibieron solo el vehículo. Tras el periodo de tratamiento, se obtuvieron
muestras de heces y se extrajeron los bazos en condiciones de asepsia.
Diluciones decimales de las heces de los ratones tratados y testigos se
sembraron en placas de TSA, MacConkey, MRS, KF (sin y con una
concentración de ciprofloxacino superior al valor de corte para cepas
resistentes). Como control de la presencia de C4 se empeló el medio LPSM. La
presencia de una población de lactobacilos indígenas resistentes a
ciprofloxacino impidió extraer conclusiones de los recuentos en TSA y MRS.
Los recuentos en MacConkey y en KF revelaron ausencia de transmisión de
resistencia a las poblaciones de enterobacterias y de enterococos.
Las suspensiones de esplenocitos se cultivaron en ausencia de estímulo y en
presencia de lipopolisacárido (mitógeno de células B) y concanavalina A
(mitógeno de células T). La proliferación celular se determinó por el método
colorimétrico que emplea una solución de bromuro de MTT. No se observó
ningún efecto significativo, debido a la ingestión de C4, ni en los tamaños de
las poblaciones de esplenocitos, ni en su proliferación en respuesta a
mitógenos. Por tanto, el tratamiento con C4 no demostró afectar a la inmunidad
sistémica en ratones inmunológicamente intactos. Dadas las evidencias previas
de que C4 puede restaurar parcialmente funciones inmunitarias en ratones
inmunosuprimidos por tratamiento con ciclofosfamida, estaríamos ante una
bacteria que no modifica la inmunidad intacta pero sí ayuda a la recuperación
de la inmunidad deteriorada.