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SENSIBILIDAD DE L. MONOCYTOGENES
A 20 DROGAS ANTIBACTERIANAS
Por los Dres. F . M. L . M ARCEN AC *, A. J. F E R N A N D E Z *
y R. W . PAOLASSO
Introducción
Este trabajo fue realizado con el objeto de conocer el nivel de
sensibilidad de las cepas locales de Listeria m onocijtógenes a las drogas
antimicrobianas más frecuentemente usadas en la práctica médica dia­
ria en nuestro país, como así también conocer su nivel de resistencia a
drogas usadas como agentes descontaminantes en medios selectivos para
su aislamiento.
Material y método
1) Cepas-, fueron ensayadas 14 cepas aisladas de materiales clíni­
cos provenientes de distintos pacientes: 8 fueron aisladas en la ciudad
de Córdoba ✓v 6 en la de Buenos Aires.
2) Antibióticos y quim ioterápicos: fueron ensayadas 20 drogas, to­
das ellas de potencia conocida: 4 betalactámicos (penicilina G, ampicilina, cefalotina y carbenicilina), 5 aminoglucósidos (gentamicina, sisomicina, tobramicina, kanamicina y estreptomicina), rifampicina, polimixina B, tetraciclina, minociclina, eritromicina, cloranfenicol, lincomicina, cotrimoxazol, sulfisoxazol, ácido nalidéxico v nitrofurantoin a.
3) Determinación d e la C.I.N.: fue determinada en placa siguien­
do la metodología recomendada por el Comité de Expertos de la OMS 6
usando medio de Mueller Hinton. Una dilución al 1/100 de un cultivo
en caldo tripticasa soya de 24 horas, fue usada como inoculo. Las placas
fueron inoculadas con un multi-inoculador.
4) Determinación de la C.B.M.: fue determinada para los siguien­
tes antibióticos: ampicilina, penicilina G, cefalotina, gentamicina, sisomicina y minociclina. Para ello fue determinada la CIM en tubo (i, usan* Hospital de Clínicas José de San Martín. Buenos Aires.
<M
> Hospital Universitario de Maternidad y Neonatología. Córdoba.
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Bol. A. N. de M edicina
do un inoculo de 105 a 10(i bacterias/ml. De los tubos de la serie que no
mostraron desarrollo visible, se efectuaron repiques a placas de agar
por medio de un trazo con asa calibrada. Como testigo, fue usado el
mismo inoculo convenientemente diluido, para que fuera posible apreciar
el número de colonias desarrollado en el trazo. Fue considerada CBM,
la concentración de antibiótico que no permitió una sobrevida mayor de
1 1 0 4 (0 .0 1 % ) de las bacterias inoculadas.
5)
Asociación ele drogas : fueron estudiadas asociaciones de anti­
bióticos betalactámicos (ampicilina, penicilina y cefalotina) con aminoglucósidos ( gentamicina y sisomicina). La concentración de aminoglucósido usada para cada cepa, fue la concentración sub-bacteriostática.
C uadro N "
1
00
G
CO
i-H
o
Ol
CO
q
C 1M
Penicilina G
Ampicilina
Cefalotina
Carbenicilina
Tobramicina
Gentamicina
Sisomicina
Kanamicina
Estreptomicina
Rifampicina
Eritromicina
Minociclina
Tetraciclina
Cloranfenicol
Lincomicina
Polimixina B
Cotrimoxazol
Sulfisoxazol
Nitrofurantoina
Ac. nalidixico
.063
CIM de 20 antibióticos sobre 14 cepas de Listeria monoci/togenes, por la técnica
de las diluciones seriadas en agar. Las cifras indican el número de cepas
sensibles para cada concentración.
to
0-1
»—H
0,1
IO
(>1
oi
3
2
2
5
1
1
c o
1
3
3
7
7
3
8
10
2
2
1
4
2
3
8
12
11
S
50
7
6
14
2
1
5
11
1
7
2
2
1
1
13
9
8
1
5
1
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2
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13
1
14
co
CS)
»-H
Vol. 5 8 — 2° Sem. 1 9 8 0
S IM P O S IO S O B R E L IS T E R IO S IS
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Resultados
Los resultados de la CIM en placa están colocados en el cuadro
N° 1. La penicilina fue más activa que la ampicilina sobre la mayoría
de las cepas. Gentamicina, sisomicina y tobramicina, tuvieron marcada
actividad, especialmente la tobramicina: todas las cepas fueron sensibles
a 0.125 ug/ml. Kanamicina y estreptomicina, tuvieron un comportamien­
to similar y fueron menos activas que los otros aminoglucósidos ensa­
yados. Rifampicina, cotrimoxazol y eritromicina, mostraron una marcada
actividad sobre las cepas ensayadas. Minociclina fue marcadamente más
activa que tetraciclina. Cloranfenicol v lincomicina tuvieron un compor­
tamiento similar. Lo mismo ocurrió con el sufisoxasol y la nitrofurantoína. Todas las cepas ensayadas mostraron un alto nivel de resistencia
frente al ácido nalidíxico y a la polimixina B. De las 20 drogas ensaya­
das, 17 de ellas inhibieron la casi totalidad de las cepas, con concentra­
ciones variables de 0.008 ug/ml a 4 ug/ml.
Para los antibióticos betalactámicos, la CIM en tubo fue ligeramen­
te menor que la obtenida en placa, en cambio para los aminoglucósidos
y minociclina, la CIM en placa fue menor que la obtenida por la téc­
nica en tubo.
En el gráfico N? 1 fueron colocados, cepa por cepa, los valores
de CIM y CBM en penicilina G, ampicilina, gentamicina y minociclina.
Fueron excluidos del gráfico sisomicina, cuyo comportamiento fue idén­
tico al de la gentamicina, y cefalotina, que tuvo un comportamiento
bacteriastático similar al de la minociclina. Las cepas de L. m onocyto­
genes estudiadas en este trabajo se comportaron con “tolerantes” frente
a los antibióticos betalactámicos, puesto que CIM y CBM se encuentran
considerablemente separadas, es decir, estos antibióticos se comporta­
ron como bacteriostáticos. Penicilina fue más activa que ampicilina:
concentraciones de 4. a 8. ug/ml fueron bactericidas para 13 de las 14
cepas, mientras que ampicilina fue bactericida con concentraciones de
8. a 16. ug/ml sobre 12 cepas, para las 2 restantes, la CBM fue supe­
rior a 16. ug/ml. El comportamiento de gentamicina y sisomicina sobre
L. monocytogenes , correspondió al de los antibióticos bactericidas: para
CIM variables entre 0.5 y 2. ug/ml, la CBM fue de 1. a 2. ug/ml. Mi­
nociclina tuvo el clásico comportamiento de los antibióticos bacteriostá­
ticos: para las 14 cepas, la CIM fue de 0.125 a 0.5 ug/ml. Para 4 cepas,
la CBM fue de 16. ug/ml, y para las 10 restantes, superiores a esa cifra.
En los ensayos realizados con asociación de betalactámicos y ami­
noglucósidos, no se logró demostración de actividad sinèrgica, enten­
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G R A F IC O H °
A C T IV ID A D
B A C T E R IO S ?,\TICA
(C I M )
Bol. A. N. de M edicina
1
Y B A C T E R IC ID A
(CB1!)
DE 4 A N T I B I O T I C O S
SOBR E 1 4 CEPAS D E L I S T E R I A K 0H 0C Y T 0G E N E 5
u g /m l
16
diendo por tal, la disminución del valor de la CIM para los betalactámicos. Sólo fue observado un efecto aditivo: la asociación fue más bac­
tericida que los betalactámiccs soios.
Discusión
Nuestros valores de CIM y CBM para penicilina, ampicilina v aminoglucósidos, fueron concordantes con los de Moellering18 y parcial­
mente con los de Me Cracken1". Nuestros valores de CIM
de ampicilina y penicilina fueron superiores a los obtenidos por otros
autores 7> 14- 1(i, en cambio, los obtenidos con aminoglucósidos, cloranfenicol y sulíamidas, fueron inferiores a los obtenidos por esos mis­
mos autores. La CBM de penicilina y ampicilina obtenidas por Gordon 7
fue de 6.3 ug/ml para ambas drogas. Los valores hallados por nosotros
para penicilina, concuerdan con esa cifra, pero nuestros valores para
ampicilina fueron netamente más altos. Los altos niveles de resistencia
de L. monocijtógenes a ácido nalidíxico y polimixina B, avalan el uso
de ambas drogas como agentes descontaminantes en medios selectivos de
aislamiento sin riesgo aparente de inhibición sobre ella.
Fue mencionado el hecho que L. monocijtógencs y S treptococcus
faecalis presentan similitud en algunas de sus características culturales
v bioquímicas. En su comportamiento frente a los antibióticos, ambas
bacterias presentan alguna similitud y también diferencias.
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Vol. 5 8 — 2 ° Sem . 1 9 8 0
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GRAFICO N ° 2
SENSIBILIDAD DE LISTERIA MONOCYTOGENES Y DE STREPTOCOCCUS PAECAXIS A 6 ANTIBIOTICOS
L . MONOCYTOGENES: 1 * cepas
( 1 ) : ERITROMICINA
( 2 ) : COTRIMOXAZOL( 3 ) :
(5 ):
AMPICILINA
STREPT. FAECALIS:
GENTAMICIKA
(6 ):
37 cepaa
( 4 ) : PENICILINA G
ESTREPTOMICINA
Frente a los antibióticos betalactámicos, ambas bacterias se mues­
tran como “tolerantes”, pero frente a otros antibióticos, el comportamien­
to de ambas bacterias lúe muv distinto. Para una demostración visual
de esta afirmación, fue confeccionado el gráfico N? 2 con las 14 cepas
objeto de este estudio, comparándolas con 3 cepas de S. faecalis co­
rrespondientes a otro estudio.12 Sólo fueron comparados 6 antibióticos:
ampicilina, penicilina, eritromicina, cotrimoxazol, gentamicina v estrep­
tomicina. Con excepción de ampicilina que fue más activa sobre Strep­
tococcus faecalis, en todos los casos, L. monocijtógenes fue mucho más
sensible. Merece destacarse su gran sensibilidad a eritromicina, cotri­
moxazol y ambos aminoglucósiaos, con comportamiento unimodal. S.
faecalis fue menos sensible a penicilina, eritromicina y cotrimoxazol,
con comportamiento bi o polimodal. Además, fue totalmente resistente
a los aminoglucósidos. Este disímil comportamiento sobre ciertos anti­
bióticos, permitiría ser usado como una prueba de identificación de am­
bas bacterias, si no se contara con otras pruebas más sencillas para
hacerlo.
Büchner y Schneierson 4, con evaluación de la sensibilidad por téc­
nicas de difusión, mencionan cepas resistentes o de resistencia mode­
rada a penicilina G, estreptomicina, kanamicina v sulfamidas. También
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Bol. A. N. de M edicina
nosotros hemos tenido oportunidad de observar hechos similares, pero
todas las cepas de sensibilidad dudosa por técnicas de difusión, fueron
invariablemente sensibles cuando fueron controladas por medio de téc­
nicas cuantitativas. Queda planteado el interrogante de si deben seguir
usándose las técnicas de difusión para evaluar la sensibilidad de L.
monocijtógenes.
Según Moellering 13, si bien el tratamiento con penicilina o ampicilina como drogas únicas suele ser exitoso, el agregado de un aminoglucósido en el tratamiento de inmunodeprimidos parece aconsejable
para prevenir recaídas.
B I B L I O G R A F I A
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5.
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7.
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