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MG
Comprobación de la
calidad de los embriones.
Colecta de embriones
en ganado Holstein.
Congelación y descongelación
de embriones bovinos
Fernando Reguera Verdejo. Veterinario.
Fernando Reguera, Técnico veterinario de Exabe Agropecuaria S.A. nos ha
proporcionado unas notas técnico divulgativas sobre la congelación y
descongelación de embriones bovinos.
En algunos años, la congelacibn de
embriones se ha mnvertido en una realiclad. El número de embriones de las
mejores vacas del mundo, cíisponibles
para su venta, es cada vez mayor. La
posibilidad de congelar embriones ha
catapultado el dcsarrollo de la térnica
de T.E.. La crioconservación permite
adaptar la oferta y la cíemanda de la
producción de emhriones por superovulación y de su transplante propiamentc clicho.
El comercio de embriones congelados evoluciona a nivel internacional:
más cle 200 socieclades norteamericanas (USA + CANAllA) son ya reconocidas en la venta cíe embriones por la
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Sociedacl Internacional de Transfcrencia de Embriones. La creación de embriotecas permite salvaguard<u^ ciertas
razas domesticas en proceso de extinción.
El primer animal nacido de emhriím
congelaclo fue en 1973 y el segundo
cinco años más tarde, hoy día se puede estimar en más de 200.000 los bovinos nacidos en el mundo.
^tños, dc:muustra que la tasa cle };esCtciím clespués cl^ transfcrir emhrioncs
congeladoti es sólo el 10'Y^ inf•rrior a la
de emhri<ín fresro, 54,1^%^ rontra b^^t, I' ^^
respectivamente. Si hahl,tmos en tí^rminos d^ eficacia cl^l m^toclo cl^ rongelacibn es del ^ii' ^^; ustu clato es niuy
aceptahle p^u•a una aplicaci^ín práctica
y comercial.
En que consiste este método
UNA TECNICA DE CONGELACION
EFICAZ PARA EL BLASTOCISTO BOVINO
Una síntesis de los resultados de los
equipos europeos en los dos últimos
La hase raclica en p^trar ^I tnetaholismo clc las células cmhrionarias ci^ manera reversihlc, a la vu^ yur^ consetvemos su inCu^;ridacl y limitanck^t la form^tcicín cle hi^lo intracelular clurante c^l
^nfriamicnto.
MUNDO 6ANADERO 1991-3
MG
. .
.
El 1[^1RA y varioti lahorrttorios extranjer^>s h^tn contrihuid^^ en la puesta a
punto <le la t^cnica de con^;elación para el ^mhrión hc>vin<^ cl^ siete u ocho
clías cle vida (hlast<^citit^^).
Las etapas esenciales son las sigui^ntes:
A.- SUSTITUCION DEL AGUA INTRACELULAR POR UNA SOLUCION
DE UN CRIOPROTECTOR APROPIADO.
Lc^s rrio^rotect^^res son compuestos
orgániros soluhles de déhil peso molecular, que penetr^tn fáciln^ente en las
células emhrionarias por un fenómeno
osmótico. Su fuerte afinidad por las
moléculas c(e a^ua permite recíucir la
velociclacl de tormacibn de microcristales de hielc^ durante el enfriamiento.
Para el hlastocist<^ hovino es muy utilizacl^> el glicer<^l en una concentración
clel 10°/,, y s^ muestr,t menos tóxico
yue el DMSO (dimétil sulfóxido), sumergiéndose ^1 emhrión 15 minutos
antes cíe envasarl^> en la pajiiela.
B.- LA CRISTALIZACION DEL MEDIO EXTRACELULAR ES UNA ETAPA CLAVE
Tiene lugar a la temperatura de -6."
b-7. "C. Está provocado por el enfriamiento muy loriliz^ick^ cíe la pajuela
cl^^ncle se ^ncuentra el embribn. Este
medi^> extrac^lular se solidifica y el
restc^ del contenido de la pajuela va
^tciquiriendo el estacio sbliclo en pocos
nlinutc>s, manteniéndose durante toda
esta fase la temperttur,i a-6 6-7 "C.
F.n este momento el agua intracelular va a comenz^ir a salir por la cliferencia cle presi^ín osmótica.
Embrión en fase de blastocisto.
viabilidad, como se coinenta en trabajos anglosajones para el embrión de
ratón.
D.- IMPORTANCIA DE LA DESCONGELACION
Los clos fen6menos están estrechamente relacionados. Una congelación
lenta hasta -30 °C debe estar asociada
a una velocidad de descongelación
muy rápida (2.000 "C/n^inuto), con el
fin de evitar la recristalización.
EI calentamiento se consigue introcluciendo la pajuela congelada en
agua a 37 "C cítuante algunos minutos.
Seguicíamente vamos a eliminar el
crioprotector antes de la transferencia,
que consiste en utilizar las propiedacles de un meclio de sucrosa, que no
penetra en la célula, pero aumenta la
presión osmótica clcl medio y favorece
la dilución pasiva del glicerol del hlas-
tocisto. El embrión ya puede ser ttansferido en el útero de la receptora mecíiante un catéter de implantación especial para emhriones.
Eficacia del método
La viabilidad del emhrión cc>ngelado puede verse afectacla por diversos
factores:
1. La calidad morfológica del blastocisto antes de la congelación. Los
embriones determinacíos en el momento de la colecta como de calidad
"1", darán los mejores índice de gest^tción después cíe la cíescongelación.
2. El origen genético de la donante.
Hay diferencias importantes en la capacidacl de congelación cle los embriones. Este es un fenómeno aún hoco
conocido.
3. La técnica del eqtiipo cíe T.E.
C.- ENFRIAMIENTO PROGRESIVO
l)espu^s cle inclucir la cristalización,
se verifica un entriamiento progresivo
del ^^rden de 0.3 "C/minuto para permitir una deshidratación progresiva de
la célula. Estas velocid,tcles se ohtienen eon la <iyucla cle un congelaclor
hiol^^gico ^rogr^tmahle que reproduce
los ciclos cle congelación con gran fiahilidad. F.I enfriamiento lento llega
hasta 30 "G, entonc^s la pajuela que
contiene el emhribn parcialmente deshidr^ttado puecle ser congelado totalmente a 196 "C. F.ste alm^icenamiento
no tienc intluencia sc^hre la tasa de
MUNDO 6ANADERO 1991-3
25 °C Temperatura ambiente.
Inducción
Cristalización
-0.3 °C/minuto
-30 °C
Detalle de enfriamiento progresivo.
-196 °C
Nitrbqeno
líquido
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