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Diagnóstico Molecular: Una Nueva Herramienta para Detección de Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae y Neisseria meningitidis por PCR en Tiempo Real. Paraguay. 2011 a Setiembre de 2013. Laboratorio Central de Salud Pública. 1León M. *, 1Chamorro G., 1Kawabata A., 1Nagai M., 2 Basualdo W., 3Irala J., 4Leguizamón M., 5Franco R. 1LCSP, 4HNI, 2HGP, 3IMT,5INERAM. La alta morbimortalidad asociada con Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae y Neisseria meningitidis se agrava por la aparición de nuevos patrones de resistencia a los antibióticos de primera elección, lo que dificulta cada vez más el tratamiento empírico de los casos de neumonía y meningitis, principalmente los causados por S. pneumoniae . El cultivo, considerado como el estándar de oro, tiene una sensibilidad de entre 30 y 45% en los mejores casos por lo que se requieren de nuevas tecnologías para su detección. Las pruebas de amplificación de DNA mediante la reacción de la polimerasa en cadena en tiempo real (PCR-rt), directamente en el líquido cefalorraquídeo de los pacientes con diagnóstico presuntivo de meningitis, han demostrado su efectividad elevando la sensibilidad hasta en un 80% en los países en donde ya se utiliza. La detección de los agentes infecciosos durante la última década, mediante la amplificación de diferentes genes bacterianos específicos por la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), ha adquirido gran importancia para el diagnóstico de neumonías y meningitis bacterianas, debido a que se pueden obtener resultados en menor tiempo, con buenas sensibilidad y especificidad. La detección temprana de estas bacterias mejora el tratamiento, acorta la estancia hospitalaria y reduce la posibilidad de secuelas neurológicas en el paciente. OBJETIVO: Identificación de S. pneumoniae, H. influenzae y N. meningitidis a partir de muestras clínicas con cultivos negativos, de pacientes pediátricos y adultos con sospecha clínica de neumonías o meningitis que acudieron a los diferentes servicios. MATERIAL Y MÉTODO: El presente estudio fue realizado en 123 muestras (LCR, sangre y líquido pleural) de pacientes pediátricos y adultos con sospecha clínica de neumonía o meningitis que acudieron a los diferentes servicios que participaron en este estudio desde el año 2011 hasta setiembre 2013, mediante RTPCR. RESULTADOS: Fueron confirmados por PCR en tiempo real, 18 casos de Neumonías (67%) y 14 casos de meningitis (15%) causados por diferentes patógenos. El 100% de los casos de neumonías tienen como agente etiológico Streptococcus pneumoniae. De los cuales el 72% fueron del sexo femenino. El grupo de edad menor o igual a cinco años prevalece con un 72%. CONCLUSIONES: Los resultados de la aplicación de técnicas moleculares en el campo de las enfermedades respiratorias y meníngeas son promisorios y se están logrando grandes avances para la detección oportuna de los agentes etiológicos. El cultivo bacteriano se considera la prueba de oro para el diagnóstico etiológico de estas infecciones. Sin embargo, el hecho de que los resultados de esta prueba no se obtengan antes de 24-48 horas hace que sea de especial interés el disponer de pruebas diagnósticas rápidas. La detección de agentes bacterianos mediante las técnicas de PCR en tiempo real ha permitido recortar este tiempo hasta incluso 4 horas. Tienen además como ventaja frente al cultivo bacteriano la capacidad de detectar no sólo microorganismos viables sino también no viables. Así, se muestra como una prueba con mayor sensibilidad y VPN que el cultivo, puede identificar bacterias en casos con cultivos negativos, ya sea por existir una baja carga bacteriana o bien por haber sido pretratado el paciente con antibiótico empírico antes de la recogida de la muestra. Grafico 1. Frecuencia casos confirmados por PCR-rt. LCSP. 2011 a Setiembre 2013. Tabla 1.Distribución de Neumonías por edad y sexo. LCSP. 2011 a Setiembre 2013. NEUMONÍAS Femenino Masculino Grupo de Edad Menor o igual de 5 años 10 5 Mayor de 5 años 1 0 Sin Datos 2 0 Total (%) 13 (72%) 5 (28%) Total Positivos 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Total 15 (83%) 1 (6%) 2 (11%) 18 (100%) MBA Tabla 2. Distribución de Meningitis por edad y sexo. LCSP. 2011 a Setiembre 2013. Neumonías Tabla 3. Frecuencia de Etiología confirmados por PCR-rt. LCSP. 2011 a Setiembre 2013. MENINGITIS Grupo de Edad Femenino Masculino Total Menor o igual de 5años 2 4 6 (43%) Mayor de 5 años 4 1 3 0 7 (50%) 1 (7%) 7 (50%) 7 (50%) 14 (100%) Sin Datos Total (%) DX Total SPN HIN NM MBA 94 8 1 5 PCR-rt positivo 14 NEUMONIA 24 18 0 0 18
