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XIX
VI TO R I A
201 5
II ENCUENTRO INTERNACIONAL DE PARASITÓLOGOS
CONGRESO DE LA SOCIEDAD
ESPAÑOLA DE PARASITOLOGÍA
ESPAÑA · FRANCIA · ITALIA · PORTUGAL
Parasitaria, Vol. 73, No. 2, 44, 201 5
Telomerasa: Una nueva función frente
al estrés oxadativo en Leishmania major
Special Issue
Telomerasa: Una nueva función frente al estrés oxadativo en
Leishmania major
Isabel M. Díaz Lozano1 , Riward Campelo2, Katherine Figarella 2, Antonio Osuna 1 , José Luis Ramírez2
Resumen
La enzima telomerasa juega un papel muy importante en los organismos eucariotas ya que se encarga de añadir seis
hexámeros en los extremos de los telomeros, elongándolos y evitando en cada nueva división celular el acortamiento de
los mismos. Además de esta función, se han ido descubierto otras nuevas tales como su intervención en la regulación
de los procesos apoptóticos y confiriendo resistencia frente al estrés oxidativo a las células, entre otras funciones. La
telomerasa fue descrita por primera vez en el protozoo Trethaymena, y su existencia en organismos unicelulares como
los tripanosomátidos parásitos Leishmania major, hace que sea de mayor importancia en la supervivencia de éstos,
donde mantiene su función esencial. Una nueva función de la enzima ha sido recientemente descubierta por nosotros,
previa caracterización molecular y bioquímica en promastigotes de L. major. Esta sería la de dar protección en
situaciones de estrés oxidativo evitando daños en las funciones mitocondriales del parásito. Además se descubrió la
presencia de dicha enzima en exovesículas secretadas por promastigotes de L. major.
Material y método: Se trató por separado diferentes cultivos de promastigotes de L. major (1 x 1 0 7 parásitos/ml) en
medio RPMI suplementado con 1 0% de SBF libre de exovesículas a los que se le añadió diferentes concentraciones de
H2O2 (1 0, 25 µM). Los cultivos se mantuvieron a 28 ºC durante 90 minutos y, posteriormente, se lavaron con PBS tras
una primera centrifugación a 1 500 rpm durante 1 0 minutos. Cada pellet se fijó con fijador de Karnosvsky para su
observación por M.E.T. Se trataron cada rejilla con cortes de los promastigotes tratados con el anticuerpo primario antiTelomerasa de conejo, y como secundario, anticuerpo anti-conejo con oro coloidal de 25 nm. Ambos a una dilución 1 :20
y tiempo de incubación de 90 minutos con lavados en PBS de 1 5 minutos entre incubación. Para la purificación de las
exovesículas se trató el sobrenadante de un cultivo de promastigotes a una serie de centrifugaciones diferenciales. Las
exovesículas fueron tratadas al igual que los cortes de los promastigotes, incubando con el anticuerpo anti-telomerasa y
vistas al microscopio electrónico de transmisión y lisadas para la identificación por Western blot tras una electroforesis
en SDS-PAGE.
(1 ) Departamento de Bioquímica y Parasitología Molecular,Facultad de Ciencias, Universidad de Granada,Granada, España.
(2) Instituto de Estudios Avanzados, Centro de Biotecnología, MppEUCT, Caracas, Venezuela. Grupo de Parasitología Molecular, Instituto de
Biotecnología, Naciones Unidas Universidad de Biotecnología. Programa para Latino América y el Caribe, Caracas, Venezuela.