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CIVTEST™ FELIS FIV CIVTEST™ FELIS FIV 1. COMENTARIOS PRELIMINARES 1- PRELIMINARY REMARKS CIVTEST™ FELIS FIV, es un test que se fundamenta en la técnica de inmunocromatografía utilizando anticuerpos monoclonales para la detección de anticuerpos de la Inmunodeficiencia felina a partir de muestras de suero o plasma. La realización del test siguiendo el procedimiento recomendado, requiere un tiempo de 10 minutos. 2. INFORMACION GENERAL CIVTEST™ FELIS FIV is a test based on immunochromatography using monoclonal antibodies for the detection of antibodies against the feline Immunodeficiency virus from samples of cat serum or plasma. This test is conducted in 10 minutes time. El Virus de la Inmunodeficiencia felina es un retrovirus perteneciente a la subfamilia lentivirinae. El virus fue descrito por primera vez el año 1986 y desde entonces se ha extendido por todo el mundo. La infección por este virus produce cambios cuantitativos principalmente en los linfocitos T, produciendo, en concreto, una disminución de los CD4+ y un aumento de los CD8+. Estas alteraciones provocan una disfunción del sistema inmunitario que hace que los animales adquieran infecciones crónicas que se muestran por medio de una inmensa variedad de síndromes. La transmisión entre animales se da de forma horizontal, principalmente por mordiscos y arañazos, y de forma vertical por vía transplacentaria o calostral. La detección de anticuerpos en sangre o sueros frente a una proteína del virus, la gp70, es la forma más común de detección de la enfermedad a nivel de clínica 3. PRINCIPIO DEL TEST 2- GENERAL INFORMATION Feline immunodeficiency is a retrovirus that belongs to the lentivirinae subfamily. The virus was first described in 1986 and it has quickly spread worldwide. Infection with this virus affects quantitatively T lymphocits, producing a decrease of CD4+ and an increase of CD8+. This deterioration in health originates a disfunction of the immune system that can be the origin of diverse syndromes and chronic infections. This disease is horizontally transmitted, mainly by biting and scratching between animals, and vertically through colostrum or via placenta. The detection of antibodies in blood or serum against gp70, a protein of the virus, is the most common way of clinical detection of the disease. 3- PRINCIPLE OF THE TEST CIVTEST™ FELIS FIV está basado en la técnica inmunocromatográfica de doble migración. CIVTEST™ FELIS FIV, is based on the immunochromatographic double migration technique. Al incorporar la muestra en la ventana nº 3, esta migra hacia la ventana nº 2 donde hay inmovilizado antígeno de FIV. En el caso de que la muestra sea positiva, los anticuerpos en ella presentes se unirán al antígeno. En la segunda fase añadimos solución tampón en la ventana nº 1. Esto hace que los complejos presentes en esta zona formados por un anticuerpo monoclonal antigato y un anticuerpo monoclonal antigp70 empiecen a migrar hacia la ventana nº 2, a la que si se han formado complejos antígeno-anticuerpo en el paso anterior (es decir si el animal es positivo) se unirán para formar una línea púrpura de positividad. Los complejos sobrantes continuarán la migración hacia la ventana nº 3 para dar la línea de control. When sample is placed in window 3 it migrates to window 2 where there is the fixed FIV antigen. When the sample is positive the antibodies will bind to the antigen. In a second phase a buffer solution is added to window 1, this allows the complexes of monoclonal anti-cat antibodies and monoclonal anti-gp70 to migrate to window 2. A purple band in window 2 will form if the sample is positive. The remaining complexes will continue spreading through the membrane forming a purple band for the kit control in the upper window of the device (window No 3). 4- STABILITY 4. ESTABILIDAD - Los reactivos se conservan a temperatura ambiente (+ 20 - 25 ºC), o pueden conservarse refrigerados a + 4 ºC. Atención: No congelar ninguno de los reactivos del kit. - La fecha de caducidad va impresa en la parte exterior de la bolsa de aluminio de cada test. 5. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA Mediante la pipeta suministrada con el kit añadir 1 gota de suero o plasma en un tubo de diluyente. Homogeneizar succionando el contenido del tubo 2 ó 3 veces con la pipeta. 6. PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO 6.1. 6.2. Abrir la bolsa de aluminio en el mismo instante que tengamos que introducir la muestra diluida. Colocar el test sobre una superficie plana. Mediante la misma pipeta utilizada para realizar la dilución de la muestra, depositar en la ventana Nº 3 del test 1 gota de la muestra diluida. La pipeta debe estar en posición vertical a más de 1 cm de distancia de la ventana Nº 3, de forma que las gotas caigan libremente. 6.3. Con el gotero incluido en el kit, adicionar 3 gotas de la solución tampón en la ventana Nº 1. - The reagents are stored at room temperature (+20 - 25 ºC), or in the fridge at +4 ºC. Warning: Do not freeze the reagents of the kit. - The expiry date is indicated on the aluminium bag of each test. 5- SAMPLE PREPARATION By means of the pipette dispense 1 drop of serum or plasma into the tube containing the diluent. Homogenise the dilution by pippeting several times. 6- TEST PROCEDURE 6.1. Open the aluminium bag at the very moment the diluted sample has to be introduced. Place the device on a flat surface. 6.2. By means of the same pipette used before, dispense 1 drop of the diluted sample in pipette must be in vertical position, 1 cm away from window 6.3. window No 3 of the device. The No 3, so that the drops fall freely. Using the dropper included in the kit, dispense 3 drops of the buffer solution in window No 1. 7- INTERPRETATION OF THE RESULTS 7. LECTURA DE RESULTADOS La reacción cromatográfica evoluciona en el sentido de Nº 1 Nº 3. Es recomendable no dar ninguna muestra definitivamente como negativa hasta pasados los 10 minutos de haber depositado la muestra en la ventana Nº 1. Resultado positivo: Aparecen unas líneas moradas horizontales en las ventanas nº 2 y nº 3. Estas líneas pueden aparecer con distinta intensidad Resultado negativo: Sólo aparece la línea morada en la ventana nº 3 (ventana control del kit) The chromatographic reaction proceeds from No 1 No 3. The reading of the results can be performed 5 minutes after introducing the sample in window No 1, but no sample should be judged as negative until 10 minutes later. Positive result: A horizontal purple line appears in windows No 2 and No 3. These lines may have different intensities. Negative result: A purple line appears only in window No 3 (control window of the kit). REPRESENTACIÓN GRÁFICA / GRAPHIC REPRESENTATION PROCEDIMIENTO / PROCEDURE 1x MUESTRA DILUIDA / DILUTED SAMPLE CIVTE ST FELIS 3x TAMPÓN / BUFFER FIV 10 MINUTOS / MINUTES LECTURA / READING Kit de diagnóstico para la detección de anticuerpos frente a la Inmunodefici encia felina. LABORATORIOS HIPRA S.A.-AVDA. LA SELVA 135-17170 AMER (GIRONA) SPAIN TEL. (34) 972430660 - FAX (34) 972430661 e-mail: [email protected] http://www.hipra.com Diagnosis kit for the detection of 3 3 2 2 1 1 POSITIVO / POSITIVE NEGATIVO / NEGATIVE antibodies against Feline Immunodeficiency.