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Vanessa Medina Villaamil
INIBIC (Grupo Oncología)
CHU A Coruña
• CÁNCER DE VEJIGA
Patología:
• Carcinoma de epitelio transicional
(90% de casos).
• Carcinoma epidermoide (7−8% de casos).
Peor pronóstico.
• Adenocarcinoma (3−4% de casos).
Tabaco: aumenta en 2−3 % el riesgo.
Afecta a ambos sexos, con más frecuencia en
varones en una relación de 3−1.
Los tumores genito-urinarios representan
un grupo de neoplasias muy relevantes dentro
de los tumores sólidos. El cáncer de próstata
(más de 18.500 nuevos casos al año), de vejiga
(17.000) y de riñón (4.000) son los tumores
urinarios más frecuentes.
•TUMOR RENAL
Patología:
1.Carcinoma de células renales 85%
(se origina en células del riñón que recubren los túbulos renales)
Etiología: influencia de carácter hormonal.
2.Carcinoma de epitelio transicional 15%
Etiología:tabaco y colorantes.
Sobrevive a los 5 años el 40%.
• CÁNCER DE PRÓSTATA
Patología:
Adenoma de próstata. Tumor benigno.
Adenocarcinoma.
Factores predisponentes: Andrógenos.
HIPÓTESIS
-La diseminación de células tumorales a partir de un tumor primario puede
ser considerada como un paso crucial para el desarrollo de metástasis.
Por ello, como se ha demostrado en estudios recientes, la detección de
células tumorales diseminadas en la sangre periférica podría ser de gran
relevancia respecto al pronóstico y estado del paciente.
Pasos en la migración de una célula maligna, desde el tumor in situ, hasta
un tejido distante, donde origina una metástasis.
HIPÓTESIS
-La detección de marcadores moleculares específicos de células tumorales
y la cuantificación de dicha expresión en sangre periférica procedente de
pacientes con neoplasias epiteliales, reflejará la existencia de células tumorales circulantes en los pacientes con cáncer.
MGH has entered into a collaborative agreement with Veridex LLC to
establish a center of excellence in research on circulating tumor cell
technologies.
Investigadores del Hospital General de Massachusetts han desarrollado
un nuevo método para detectar las llamadas células tumorales
circulantes (CTC) las cuales escapan de los tumores sólidos para echar
raíces en nuevos sitios del cuerpo contribuyendo a la metástasis
del cáncer. La nueva prueba que está siendo desarrollada
conjuntamente con la empresa farmaceútica Johnson&Johnson
consiste en un microchip capaz de detectar dichas células en medio
de millones de células sanas, lo cual permitirá a los médicos predecir
qué tratamiento puede funcionar mejor para el tumor de cada
paciente, evitando que se disemine por otras partes del cuerpo y, de
la misma forma, averiguar si éste está trabajando rápidamente o está
fracasando con el tratamiento.
http://www.biotecnologica.com/
HIPÓTESIS
-Los miARNs que presenten expresión diferencial en células tumorales con
respecto a células normales, serían buenos candidatos a ser marcadores para
la detección de micrometástasis ó enfermedad mínima residual. Los perfiles de
expresión de los miARNs proporcionarán información pronóstica y diagnóstica
del cáncer.
Esta obra de Claudia Bentley, titulada “All seeing all
controlling”, recuerda la estructura con autoapareamientos
imperfectos de los miroARNs inmaduros. Fue portada de
la revista Nature Reviews of Cancer en Abril de 2006.
Gandellini P et al. 2011
Expert Opin. Ther. Targets
Cómo actúan los miARNs cómo oncogenes ó supresores tumorales??
¿Qué se sabe de los miARNs?

La expresión anormal de microARNs (miARNs),que negativamente regulan la
expresión génica a nivel posttranscripcional, está asociado con la
patogénesis del cáncer. Como pueden actuar
como oncogenes o supresores de tumores, se han
propuesto como posibles nuevas dianas terapéuticas o herramientas para la
terapia del cáncer.

Tanto la expresión forzada como la downregulación de los miARNs han
demostrado tener efectos antitumorales en varios
modelos experimentales. Silenciar un oncomir podría permitir
re-expresión de los genes supresores de tumores, mientras que
re-expresión de un miARNs supresores de tumores podrían regular a la
baja su objetivo de oncogenes, lo que, en última instancia alterar la
supervivencia, crecimiento o capacidad metastásica de la célula tumoral.

En el contexto terapéutico, la interferencia con miARNs específicos para el
cáncer podría ser aprovechado para mejorar la respuesta de las células
tumorales para agentes convencionales. Además, alterar la expresión de
determinados miARNs podría proporcionar información acerca de la
sensibilidad o la resistencia de los tumores individuales a diferentes
tratamientos antes de iniciar el tratamiento (predicción de respuesta). Una
vez más, cambios en la expresión de miARNs específicos durante la
terapia puede ofrecer una herramienta para la monitorización de un
tratamiento exitoso (control de respuesta).
¿Qué se sabe de los miARNs?

La naturaleza multiespecífica de regulación génica basada en miARN es a la
vez una fortaleza y una debilidad, ya que interferir con la expresión del
miARN podría dar lugar a efectos imprevisibles fuera del objetivo de ARNm no
deseados y obtener la inmunidad activa "señales de peligro". Futuros
programas terapéuticos serán fundamentales para estudiar los efectos del
miARN-inducidos en las células normales y evaluar la toxicidad potencial en
especies superiores.

El desarrollo de enfoques para aportar agentes miARN-moduladores
específicamente a las células de interés es una cuestión importante por
resolver antes de que la terapéutica basada en miARN entre en la clínica.
OBJETIVOS
-Búsqueda, mediante análisis bioinformático y bibliográfico, de miARNs que
presenten expresión selectiva, diferencial y específica en células tumorales
procedentes de neoplasias genitourinarias (especialmente uroteliales y de
próstata) con respecto a células normales no tumorales que puedan ser
marcadores moleculares útiles para la detección clínica de micrometástasis
o enfermedad mínima residual.
OBJETIVOS
dbDEMC
A Database of Differentially Expressed miRNAs in Human Cancers
OBJETIVOS
dbDEMC
A Database of Differentially Expressed miRNAs in Human Cancers
OBJETIVOS
dbDEMC
A Database of Differentially Expressed miRNAs in Human Cancers
Cáncer de Próstata
286 resultados Up:40 Down:246
Cáncer de Riñón
305 resultados Up:135 Down:170
OBJETIVOS
dbDEMC
A Database of Differentially Expressed miRNAs in Human Cancers
OBJETIVOS
Búsqueda bibliográfica
Farazi T et al. J Pathol 2011; 223: 102–115
OBJETIVOS
Búsqueda bibliográfica
Prostate
Ambs S. Cancer Res 2008;68:6162-6170.
OBJETIVOS
miARNs CANDIDATOS SOBRE
1.CARCINOMA RENAL:
hsa-miR-368 y hsa-miR-377
2.DIFERENCIALMENTE EXPRESADOS EN RIÑÓN:
Clusters hsa-miR-141 y hsa-miR-200c
hsa-miR-200b (p=0)
hsa-miR-31 (p=1,35292.10-12)
3.UPREGULATED EN VEJIGA:
hsa-miR-31 (p=0,00343248)
hsa-miR-200c y hsa-miR-144
4. DIFERENCIALMENTE EXPRESADOS EN VEJIGA:
hsa-miR-141 y hsa-miR-200b (p=0,0117237)
5. UPREGULATED EN PRÓSTATA:
hsa-miR-145, hsa-miR-let-7c y miR-200c
OBJETIVOS
OBJETIVOS
Yousaf A. et al. Curr Drug Targets. 2010 July ; 11(7): 801–811.
OBJETIVOS
Lawrie C. 2009 British Journal of Haematology, 150, 144–151
Confirmación in vitro de la búsqueda bioinformática
-CULTIVO LÍNEAS CELULARES:
RIÑÓN, PRÓSTATA Y VEJIGA
RNA total con
miARNs
LÍNEA RIÑÓN ACHN
LÍNEA PRÓSTATA VCAP
Tumor renal
LÍNEA VEJIGA HT1376
Adenocarcinoma de Próstata
Detección y cuantificación de miARN mediante qRT-PCR.
Candidato nº1 hsa-miR-let7c
Encontramos una expresión 4 veces superior entre tejido tumoral de
Próstata y pool de sangres sanas (grupo control). Casi no presenta
expresión en KG1.
Detección y cuantificación de miARN mediante qRT-PCR.
Candidato nº2 hsa-miR-31
Encontramos una expresión 6 veces superior entre línea tumorales
de Vejiga (HT1197 y HT1376) y pool de sangres sanas (grupo
control). Casi no presenta expresión en K562.
miR31
Vejiga Normal
Vejiga Tumoral
mirGator DB
Detección y cuantificación de miARN mediante qRT-PCR.
Candidato nº3 hsa-miR-200c
Encontramos una expresión 104 veces superior entre tumores de
Riñón y pool de sangres sanas (grupo control). Entre las líneas
tumorales de próstata (VCaP y LNCap) y el pool de sangres sanas
observamos una diferencia de expresión de unas 3 veces siendo
más marcada esta diferencia para VCap. Las líneas de vejiga
presentaron una expresión de 1.6 veces más.
hsa-miR-200c
Rango expresión (Log)
Expresión miR200c
100000
1000
10
0.1
HT13 HT11
ACH VCap LNCa Tejido Tejido Tejido Pool
Serie1 1.555 1.606 0.234 2.901 2.168 0.73
Muestras
6953 16651
1
CONCLUSIONES

Detección y cuantificación de miARN mediante qRT-PCR y
confirmación de las búsquedas bioinformáticas y
bibliográficas.

Panel de miARN sobreexpresados en líneas celulares
tumorales y tejidos genitourinarios y con mínima expresión en
sistema hematopoyético (estudio in silico).

Potencial utilidad de miARN como biomarcadores de EMR.
HOWARD HUGHES MEDICAL INSTITUTE BULLETIN
February`09
Estudio de Polimorfismos asociados a miARNs
Title: In silico search of Single Nucleotide Polymorphisms impacting the
regulation of microRNA-related genes in genitourinary tumors.
Introduction and Objectives: The binding between miRNA and mRNA
can be affected by single-nucleotide polymorphisms (SNPs) that can reside
in the target site: SNPs can either weaken or reinforce the binding sites the
reby altering the normal regulation of a given gene. Identification of germ
line genetic variants that predict clinical outcome has become an
increasingly promising approach that complements to somatic biomarkers.
We hypothesized that common sequence variants in genes of miRNA and
of the miRNA biogenesis pathway could affect genitourinary (GU) tumors
clinical outcomes.
Gracias por su atención!!