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MUTACIONES EN LAS CONEXINAS 26 Y 30 EN NIÑOS CON SORDERA NO SINDRÓMICA Gravina, Luis Pablo1; Prieto María Eugenia3; Garrido Jennifer2; Foncuberta María Eugenia1; Hugo, Martin3; Barreiro, Cristina2; Chertkoff; Lilien1 Laboratorio de Biología Molecular (Genética)1. Servicio de Genética2. Servicio de Otorrinolaringología (ORL) – Programa de Implante Coclear3. Hospital de Pediatría “Prof. Dr. Juan P. Garrahan”. Buenos Aires. e-mail: [email protected] INTRODUCCION La sordera es una patología compleja que afecta a alrededor de 1/1000 niños. Un 50-60% de los casos se debe a factores genéticos, la mayoría de los cuales son no sindrómicos y de herencia autosómica recesiva. El primer locus asociado con sordera nosindrómica fue DFNB1, localizado en 13q12. Este locus contiene el gen GJB2, que codifica para la Conexina 26 (Cx26), una proteína de membrana que se expresa en la cóclea. Un 50% de las sorderas no-sindrómicas recesivas (SNSR) está causado por mutaciones en el gen GJB2. En la mayoría de las poblaciones estudiadas, aún con el análisis exhaustivo del gen GJB2 se observó que un número inusualmente alto de pacientes presentaban un único alelo GJB2 afectado. Recientemente se describió, en población española, una deleción de 342Kb en el gen GJB6 muy cercano al anterior que codifica para la Conexina 30 (Cx30). Esta deleción, denominada (GJB6-D13S1830), se detectó en alrededor del 50% de los pacientes heterocigotas GJB2, siendo la segunda mutación más frecuente en España detrás de 35delG. En nuestra población, un estudio preliminar de mutaciones en Cx26, mostró una alta prevalencia de 35delG y la presencia de 167delT, una mutación frecuente en judíos Ashkenazi. OBJETIVO Determinar la contribución de las mutaciones en las Conexinas 26 y 30 en el desarrollo de sorderas no-sindrómicas recesivas en una población pediátrica de Argentina. MATERIALES Y METODOS Análisis Molecular Población estudiada • 36 pacientes con hipoacusia neurosensorial no sindrómica severa a profunda (24 mujeres y 12 varones; rango etario: 19 meses a 17 años). • 24 familiares en primer grado (hermanos y padres). • Cirterios de exclusión: Pacientes con anomalías asociadas a sorderas sindrómicas o con malformaciones aisladas, antecedentes de riesgo audiológico y alteraciones neurológicas. • Se extrajo ADN genómico a partir de leucocitos de sangre periférica por precipitación salina. • Las mutaciones 35delG y 167delT se analizaron mediante PCR-RFLP utilizando las enzimas BslI y PstI respectivamente. • (GJB6-D13S1830) se estudió por PCR multiplex con primers que amplifican la secuencia normal y secuencias adyacentes a la deleción. • Se secuenció la región codificante de Cx26 (exon 2) en los pacientes heterocigotas utilizando primers descriptos previamente (ABI Prism 310 – Applied Biosystems). 165bp 97bp 68bp Figura 1 Figura 3 Figura 2 RESULTADOS Se detectaron mutaciones en 13 pacientes (36%). En 11 se estableció el genotipo completo y en 2 se identificó una sola mutación. Genotipos identificados Alelos detectados 16 14 12 10 8 6 4 2 0 35delG (GJB6-D13S1830) 167delT R143W V37I N° de familias Genotipo Grado de sordera 5 35delG/35delG Bilateral profunda 2 35delG/(GJB6-D13S1830) Bilateral profunda 1 (GJB6-D13S1830)/(GJB6-D13S1830) Bilateral profunda 1 35delG/167delT Bilateral profunda 1 35delG/R143W Bilateral profunda 1 167delT/V37I Bilateral profunda 2 35delG heterocigota Bilateral profunda • El estudio de padres y hermanos permitió confirmar herencia autosómica recesiva y detectar portadores • La secuenciación de Cx26 permitió completar el genotipo en 2 pacientes. No se detectaron mutaciones nuevas. CONCLUSIONES Estos resultados permiten concluir que las mutaciones en Cx26 y Cx30 son una importante causa de SNSR en nuestra población. La presencia de (GJB6-D13S1830) en el 5,6% de los alelos analizados y más aún, la detección de un sujeto homocigota, muestra que el estudio de la Cx30 debe formar parte del diagnóstico molecular de pacientes con hipoacusia neurosensorial no-sindrómica. Si bien la mutación 35delG es ampliamente mayoritaria, la incorporación de 167delT y la deleción de Cx30 (GJB6-D13S1830) al diagnóstico de esta patología aumenta significativamente el número de pacientes detectados con genotipo completo. La secuenciación de Cx26 en el grupo de pacientes sin mutaciones identificadas permitirá establecer la real contribución de las conexinas 26 y 30 en el desarrollo de las sorderas no sindrómicas.
