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Nucleoide Citoplasma Membrana celular Cápsula Flagelo Pili Pared celular Clasificación tradicional Reino Animalia Reino Plantae Tres Reinos: Sistema de Haeckel (1894) Protistas atípicos Reino Protistas Protozoa Protophyta Reino Planta Reino Animal Esquema de Margulis: dos dominios y 5 reinos (1988-1996) Dominio Prokarya Reino Bacteria Reino Protoctista Reino Fungi Dominio Eukarya Reino Plantae Reino Animalia Cuatro Subdominios (Mayr 1990) Dominio Prokaryota Subdominio Eubacteria Subdominio Archaebacteria Dominio Eukaryota Subdominio Protista Subdominio Metabionta Reino Metaphyta (Plants) Reino Fungi Reino Animalia Reino Mychota Sistema de Copeland: cuatro Reinos (1956) Reino Protoctista Reino Plantae Reino Animalia Reino Monera Whittaker: Cinco Reinos (1969) Reino Protista Reino Plantae Reino Fungi Reino Animalia Tres Dominios (Woese 1990) Dominio Bacteria Dominio Archaea Dominio Eucarya Cavalier-Smith 1998 Suprareinos y Seis Reinos Superreino Prokaryota Reinos Bacteria Superreino Eukaryota Reino Protozoa Reino Animalia Reino Fungi Reino Plantae Reino Chromista La línea verde indica origen bacteriano de los cloroplastos La línea roja indica origen bacteriano de las mitocondrias DOMINIOS: Caracteres que los definen BACTERIA ARCHEA EUKARYA Células procariotas eucariotas Núcleo con NO SI Membranas lipídicas enlaces eter, ramificado enlazados por éster, no ramificados enlazados por éster, no ramificados organelas NO SI ribosomas 70S 80S La taxonomía es la ciencia de la clasificación, agrupa y separa los organismos vivos de acuerdo a sus características fenotípicas o genéticas. Para propósitos de clasificación, los organismos usualmente son reconocidos en órdenes superiores, familias, géneros, especies y subespecies. Es una ciencia ARTIFICIAL, influida por los avances en las técnicas. SE DIVIDE 1. CLASIFICACION 2. NOMENCLATURA 3. IDENTIFICACION “Es la ordenación de los microorganismos en grupos o taxones en función de semejanzas mutuas o de parentesco evolutivos” El objetivo es el de ser ESTABLE, OBJETIVA Y PREDICTIVA “Es la asignación de un nombres específico a los grupos taxonómicos de acuerdo a criterios y normas preestablecidas y adminitidas internacionalmente” “Es la parte práctica de la taxonomía, dado que permite encuadrar un determinado organismo en un grupo taxonómico previamente establecido” Las distintas categorías taxonómicas se definen por las propiedades y características que poseen las bacterias que las integran. Los datos reciben el nombre de caracteres taxonómicos. E incluyen caracteres fenotípicos, genéticos y quimiotaxonómicos. FENOTÍPICOS • • • • • 1) MORFOLÓGICOS 2) BIOQUÍMICAS/FISIOLÓGICAS 3) SEROLÓGICAS 4) FAGOTIPIA 5) PRUEBAS DE INHIBICIÓN GENÉTICOS • 1 ) ADN / ARN: contenido de G+C, hibridación ADN-ADN, secuenciación del ARNr QUIMIOTAXONÓMICOS • 1) MEMBRANA CITOPLASMÁTICA: ácidos grasos, tipos de lípidos polares, presencia de ácidos micólicos • 2) PARED CELULAR: tipos de peptidoglucano, presencia de ácidos teicoicos • 3) PROTEÍNAS: comparación perfil proteínas, secuencia de aminoácidos T A X ENFOQUE CLÁSICO O N O TAXONOMÍA NUMÉRICA M Í A ENFOQUE GENÉTICO O MOLECULAR RASGO O CARACTERISTICA Forma Tamaño Morfología de colonia Características ultraestructurales Tinción Mecanismo de motilidad Inclusiones celulares Fuentes de carbono y nitrógeno Constituyentes de pared celular Fuente de energía Productos de fermentación Temperatura óptima de desarrollo y rango Tolerancia osmótica Relación con el oxígeno pH óptimo y rango Sensibilidad a inhibidores y antibióticos Usa las características bioquímicas, morfológicas y culturales, así como las susceptibilidad a los antibióticos y compuestos inorgánicos, para determinar el grado de similitud entre organismos. Se calcula luego un coeficiente o porcentaje de similitud. Se construye un dendrograma o matriz de similitudes entre los organismos. Ejemplo de codificación de datos Estados Característicos Cepa A Cepa B Cepa C Cepa D 1 + + - 0 2 + + + + 3 + + + - 4 - + 0 0 5 + + + + 6 + + - + 7 + + - 0 8 0 - + + 9 + + + + 10 + + + - 11 + 0 - 0 12 + + + - Coeficiente %S dispuesto de manera arbitraria 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1 100 50 48 56 84 49 39 51 52 51 53 48 2 50 100 50 85 51 53 43 51 93 49 48 94 3 48 50 100 52 50 34 32 86 52 93 89 50 4 56 85 52 100 57 54 39 58 93 54 52 89 5 84 51 50 57 100 51 41 52 53 52 56 59 6 49 53 34 54 51 100 89 80 55 82 87 53 7 39 43 41 39 41 89 100 29 43 29 39 44 8 51 51 85 58 52 80 29 100 80 88 78 51 9 52 93 52 93 53 55 43 80 100 51 50 89 10 51 49 93 54 52 82 82 29 88 100 81 49 11 53 48 89 52 56 87 39 78 50 81 100 48 12 48 94 50 89 59 53 44 51 89 49 48 100 2 12 94 4 85 89 9 93 89 93 3 50 50 52 52 10 49 49 54 51 93 11 48 48 52 50 89 81 8 51 51 58 80 86 88 78 6 53 53 54 55 34 82 87 80 7 43 44 39 43 32 29 39 29 89 1 50 48 56 52 48 51 53 51 49 39 5 51 59 57 53 50 52 56 56 51 41 84 2 12 4 9 3 10 11 8 6 7 1 %S agrupados DENDROGRAMA GRUPO 50 60 70 80 90 100 C freundii 1 C diversus 2 Citrobacter Escherichia coli GÉNERO Y ESPECIE 3 El significado ideal de la identificación y clasificación debe ser comparar la secuencia de cada secuencia de genes en una cepa dada, con la secuencia de genes para cada especie conocida. El método que se usa es la hibridización. Este método puede ser usado para medir el número de secuencias de DNA que dos organismos cualesquiera tienen en común y para estimar el porcentaje de divergencia dentro de las secuencias de DNA que están relacionadas pero no son idénticas. • BRINDA UN CONCEPTO MÁS UNIFICADO DE ESPECIE • ES MÁS OBJETIVA Y ESTABLE • SE PUEDEN ORGANIZAR ESQUEMAS DE IDENTIFICACIÓN FIDEDIGNOS • INDICA CÓMO EVOLUCIONARON LOS MICROORGANISMOS Y CÓMO PUEDEN AGRUPARSE ESPECIE Grupo taxonómico básico Menos definido que para organismos superiores Rasgos morfológicos no tan importantes Puede ser considerada como una colección de cepas que muestras muchos rasgos en común y difieren considerablemente de otras cepas Una CEPA de una especie es considerada como CEPA TIPO (comparar) SUBESPECIE Basada en variaciones fenotípicas y genotípicas menores, pero constantes. Es la categoría más baja aceptada oficialmente CATEGORÍAS INFRASUBESPECIE Nombre preferido Sinónimo Cepas que tienen biovar biotipo prop bioquímicas o fisiológicas especiales serovar serotipo prop antigénicas distintivas patovar patotipo prop patogénicas para ciertos animales fagovar fagotipo morfovar morfotipo lisis por ciertos fagos rasgos morfológicos especiales TIPOS DE CLASIFICACIÓN • 1) FENÉTICAS O FENOTÍPICAS • 2) FILOGENÉTICAS O FILÉTICAS Se comparan macromoléculas que se comportan como “cronómetros evolutivos”. Sus característcias son: 1. distribución universal 2. realizar la misma función en todos los seres vivos 3. sus secuencias deben permitir la identificación de regiones de homología y heterogeneidad 4. la tasa de cambio de la secuencia de la macromolécula debe estar en correlación con la distancia evolutiva EL USADO ES EL ARNr, Y DENTRO DE ELLOS EL 16S A. TINCIÓN: Gram, AAR, Cápsula B. MÉTODOS BIOQUÍMICOS: actividad enzimática, medios selectivos C. MÉTODOS SEROLÓGICOS: aglutinación en porta, ELISA, IFI D. TIPIFICACIÓN POR BACTERIÓFAGOS: altamente específicos (placa) E. SECUECIACIÓN DE AMINOÁCIDOS F. PERFIL DE ÁCIDOS GRASOS G. COMPOSICIÓN DE BASES DEL DNA: % de G+C H. HIBRIDIZACIÓN DEL DNA CULTIVO PURO MORFOLOGÍA DE COLONIA Y GRAM CARACTERÍSTICAS DE CRECIMIENTO PROPIEDADES BIOQUÍMICAS PROPIEDADES ANTIGÉNICAS CARACTERÍSTICAS GENÉTICAS O MOLECULARES PORCENTAJE DE G+C HIBRIDACION ESTABILIDAD TÉRMICA DIFICULTADES EN LA IDENTIFICACIÓN • Asegurarse que se trabaja con un cultivo PURO • Trabajar desde categorías mayores a menores • APLICAR EL SENTIDO COMÚN EN CADA PASO • Usar el menor número de pruebas • Comparar el aislamiento con cepas tipo o de referencia DIFICULTADES EN LA IDENTIFICACIÓN CUANDO NO SE LOGRA IDENTIFICAR EL AISLAMIENTO: • Controlar pureza • Asegurarse apropiadas que se han realizado las pruebas • Controlar que los métodos sean confiables • Que se han usado correctamente las distintas claves y tablas Diagnóstico Investigaciones Clínico No microbiológicas Tomar correctamente Rotular y embalar adecuadamente Almacenar y transportar correctamente No teñidos o teñidos con Gram u otra tinción Característica de colonia, morfología, hemólisis, pigmento, etc. Por difusión en discos o MIC Serología Tecnologías de DNA CLASIFICACION DEL DOMINIO BACTERIA (Bergey 2001) El Manual Bergey categoriza a las bacterias en taxones basados en la secuencia de ARNr Por otra parte lista características identificatorias de las bacterias tales como: morfología celular, coloración de Gram, requerimientos de oxígeno las bacterias del phylum Proteobacterias son Gram negativas Alfa Proteobacterias: los integrantes de este sub-phylum crecen con niveles bajos de nutrientes (oligotróficos), algunos poseen prostecas (prolongaciones celulares) . Incluye a fijadores de nitrógeno, quimioautotrofos y quimioheterotrofos Beta Proteobacterias: los integrantes de este sub-phylum habitan en el agua y suelo. Algunos son patógenos humanos, incluyen quimioautotrofos y quimioheterotrofos. Bordetella, Burkholderia, Neisseria Gama Proteobacterias: incluye los ordenes Pseudomonadales, Legionellales, Vibrionales, Enterobacteriales, Pasteurellales, Francisella Delta Proteobacterias: incluye los géneros Myxococcus y Bdellovibrio, parásitos de otras bacterias y el género Desulfovibrio Epsilon Proteobacterias: incluye los patógenos humanos Campylobacter y Helicobacter Bacterias Gram negativas No-proteobacterias Las phyla de bacterias Gram negativas no relacionadas filogeneticamente a Proteobacteria se clasifican en varios phyla de Gram negativas no Proteobacterias 1. El phylum Cyanobacteria corresponde a los fotoautotrofos que utilizan la luz como fuente de energía y CO2 como fuente de carbono y producen O2 durante la fotosíntesis 2. Los quimioheterotrofos incluyen Chlamydia (phylum Planctomyces), Bacteroides (phylum Bacteroides), Fusobacterium (phylum Fusobacteria) y Treponema, Borrelia y Leptospira (phylum Spirochetes). Muchos de ellos patógenos humanos El Manual Bergey divide a las bacterias Gram Positivas de acuerdo a su contenido de G+C 1. Bacterias Gram Positivas de alto contenido de G+C (phylum Actinobacteria) incluye el importante género Mycobacterium y los géneros filamentosos Actinomyces y Streptomyces, formadores de conidiosporas. Los no formadores Nocardia y Frankia también se incluyen aquí. Corynebacterium, Propionibacterium 2. Bacterias Gram Positivas de bajo contenido de G+C (phylum Firmicutes) incluye a las bacterias del suelo, las lácticas y numerosos patógenos. Los órdenes Clostridiales (Clostridium), Bacillales (Bacillus) Lacobacilalles (Staphylococcus, Streptococcus, Listeria y Lactobacillus). También incluye a Micoplasmas (todavía clasificados como Gram negativos), pero como se tiñen débilmente por su falta de pared, se incluyen entre las bacterias Gram positivas de bajo contenido de G+C Las bacterias fotosintetizadoras verdes (sulfúreas y no sulfúreas) y las púrpuras (sulfúreas y no sulfúreas) son fotoautotrofas gram negativas que usan energía luminosa y CO2 como fuente de carbono y no producen O2 (anoxigénicas). Se las clasifica por una parte dentro de dos sub-phyla diferentes de las Proteobacterias y por otra dentro de las no Proteobacterias “El estudio científico de los tipos y diversidad de organismos y de cualquiera y todas las relaciones entre ellos " (Simpson, 1961) REINOS Animalia • 1753 C. Linnaeus 2 Reinos Plantae • 1800´s E. Haeckel 3 Reinos Animalia Plantae Protista REINOS Animalia Plantae • 1969 H.R. Whitaker 5 Reinos Protista Fungi Monera Eukaryotes • 1977 C. Woese 3 Reinos Archaebacteria Eubacteria REINO DIVISIÓN I: Gracilicutes CLASE I: Scotobacteria CLASE II: Anoxyphotobacteria CLASE III: Oxyphotobacteria DIVISIÓN II: Firmicutes CLASE I: Firmibacteria CLASE II: Thallobacteria DIVISIÓN III: Tenericutes CLASE I: Mollicutes DIVISIÓN IV: Mendosicutes CLASE I: Archaobacteria Procaryotae REINO REINO Animalia Procaryotae Phylum: Cordata Gracilicutes Clase: Mammalia Scotobacteria Orden: Primates Spirochaetales Familia: Hominidae Género: Homo Especie: sapiens Spirochaetaceae Treponema pallidum Las Proteobacterias son uno de los principales grupos de bacterias. Patógenas y de vida libre, e incluyen muchas de las bacterias responsables de la fijación del nitrógeno.Gram negativas, con una pared celular formada principalmente de lipopolisacáridos. Muchas se mueven utilizando flagelos. La mayoría de las proteobacterias son anaerobias, pero hay muchas excepciones. La nutrición es usualmente heterótrofa,pero hay grupos que realizan fotosíntesis. Las proteobacterias se dividen en cinco grupos, usualmente considerados clases, según los estudios de las secuencias de ARNr. Estos grupos se denominan según las letras griegas de alpha a epsilon Proteobacterias alpha Las proteobacterias alpha abarcan la mayoría de los géneros fototrofos, pero también varios géneros que metabolizan componentes C1, simbiontes de plantas (por ejemplo, rhizobia) y de animales y un grupo de patógenos peligrosos, Rickettsiaceae. Por otra parte, se piensa que los precursores de las mitocondrias de la células eucariotas se han originado en este grupo bacteriano. Proteobacterias beta Las proteobacterias beta abarcan varios grupos de las bacterias aerobias o facultativas que son a menudo altamente versátiles en sus capacidades de degradación, pero también contienen géneros quimiolitotróficos y algunos fototrofos. Las Proteobacterias beta juegan un papel importante en la fijación de nitrógeno en varios tipos de plantas, oxidando amonio para producir nitrito, un producto químico importante para la función de las plantas. Muchas de ellas se encuentran en muestras ambientales, tales como aguas residuales o el suelo. Especies patógenas dentro de esta clase son Neisseriaceae (que causa gonorrea y meningoencefalitis) y las especies del género Burkholderia. Proteobacterias gamma Las proteobacterias gamma abarcan varios grupos de bacterias importantes para la ciencia y la medicina tales como Enterobacteriaceae, Vibrionaceae y Pseudomonadaceae. Este grupo incluye varios patógenos importantes, como por ejemplo, Salmonella (enteritis y fiebre tifoidea), Yersinia (peste), Vibrio (cólera), Pseudomonas aeruginosa (infecciones del pulmón en pacientes hospitalizados o con fibrosis quística). Proteobacterias delta Abarcan un grupo de géneros predominante aerobios, myxobacteria, que forman cuerpos fructíferos y un grupo de géneros estrictamente anaerobios, que contienen la mayor parte de las bacterias reductoras de sulfato y de las bacterias reductoras de sulfuro junto con otras bacterias anaerobias con diferente fisiología. Proteobacterias epsilon Comprenden solamente unos pocos géneros, principalmente Wolinella, Helicobacter y Campylobacter,que tienen forma helicoidal. La mayor parte de las especies conocidas habitan en el tracto digestivo de seres humanos y animales y proporcionan servicio como simbiontes (Wolinella en el ganado vacuno) o son patógenos (Helicobacter en el estómago, Campylobacter en el duodeno). También se han recuperado numerosas secuencias ambientales de respiraderos fríos e hidrotermales.