Download utilización de anticuerpos en biomedicina

UTILIZACIÓN DE
ANTICUERPOS EN
BIOMEDICINA
Métodos y Técnicas de Estudio en Biología
Celular
UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS
EN BIOMEDICINA
Inmunoblotting (western blot), Dot/slot blot
Inmunocitoquímica
Inmunofluorescencia
Inmunoprecipitación
ELISA/EIA/RIA
Cromatografía de inmunoafinidad
Microscopia electrónica (morfología)
Estructura de los anticuerpos
Tipos de Anticuerpos
Selección clonal: Delección
Selección clonal: expansión
Conceptos
Inmunógeno, antígeno.
Carrier: BSA, KLH.
Unión covalente (cross-linking): MBS,
glutaraldehido, DSS.
Péptidos inmunogénicos
Proteínas nativas y desnaruralizadas.
Otras moléculas
Adjuvante de Freund: completo e incompleto.
Primera inmunización y recuerdos.
Anticuerpos policlonales
1. Inmunización del
conejo
2. Recuerdos
3. Extracción de sangre
4. Preparación del
suero
5. Purificación del
anticuerpo (métodos
opcionales)
6. Caracterización del
antisuero
Anticuerpos policlonales
Anticuerpos monoclonales
1. Inmunización del
ratón
2. Extracción del
bazo
3. Preparación de
hibridomas
(mieloma+B)
4. Selección de los
clones
5. Producción y uso
de anticuerpos
Elección del tipo de anticuerpo
Marcaje de Anticuerpos
Marcaje de Anticuerpos para uso
en Células
Immunoblotting (western blot)
Inmunocitoquímica
Las flechas indican la
presencia de neuronas
con hormona liberadora
de la hormona del
crecimiento en el Núcleo
Arcuato (cerebro) de rata
de 4 meses.
Inmunocitoquímica
Localización de la
“calbinding”
(calbindina) en
cerebelo de rata
Microscopia (confocal e
inmunofluorescencia)
Inmunoprecipitación
Inmunoprecipitación
ELISA
ELISA
Cromatografía de inmunoafinidad
Oro Coloidal
Internalización de transferrina marcada con oro coloidal (6,6
nm) en células endoteliales. La barra corresponde a 0,25 mM.
Oro Coloidal
Internalización de transferrina marcada con oro coloidal (6,6 nm). G:
aparato de Golgi; Lu: lumen vascularLa barra corresponde a 0,25 mM