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(Biología 2º bach. Logse) Clonación de la insulina humana pág 1 /2
CLONACIÓN DEL GEN DE LA INSULINA
HUMANA EN BACTERIAS
ROTURA POR ÓSMOSIS, CRIOFRACTURACIÓN..
...
(DNA insulina monocatenárico)
Ribosomas, enzimas, DNA,
RNAm (insulina)...etc
ULTRACENTRIFUGACIÓN
Y SEPARACIÓN
POR Pm Y
FORMA
Transcriptasa
inversa vírica +
precursores del
DNA
RNAm insulina maduro (sin intrones)
DNA polimerasa
A) Preparación del plásmido bacteriano con
“extremos pegajosos” o “ganchos”
(DNA insulina humana bicatenárico)
Enzima de
restricción
bacteriano
específico
(Plásmido cortado con extremos “pegajosos”)
(Biología 2º bach. Logse) Clonación de la insulina humana pág 2 /2
B) Preparación del gen a insertar con extremos pegajosos
complementarios (adición de eslabones y “corte”)
DNA ligasa
+
(DNA de insulina con extremos
“pegajosos”)
(El mismo enzima de restricción bacteriano usado para el plásmido)
DNA ligasa
C) Unión del gen al plásmido por los extremos pegajosos.
+
Gen insulina con ganchos pegajosos
Plásmido abierto con ganchos
pegajosos complementarios
D) Búsqueda y clonación de la bacteria “transformada”.
Sin plásmidos: mueren ante tetraciclina y ampicilina
Con plásmidos sin el gen: sobreviven ante tetraciclina
y ampicilina
Con plásmidos con gen de la insulina insertado:
sobreviven ante ampicilina y mueren ante
tetraciclina
ADICIÓN DE PLÁSMIDOS A CULTIVO
BACTERIANO Y “TRANSFORMACIÓN”
TECNICA DE “RÉPLICA DE
PLACAS” Y USO DE
ANTICUERPOS RADIOACTIVOS
DE LA INSULINA