Download enucleación de globos oculares porcinos y posterior ablación del

ENUCLEACIÓN DE GLOBOS OCULARES PORCINOS Y POSTERIOR
ABLACIÓN DEL BOTÓN CORNEOESCLERAL PARA SU CONSERVACION
EN MEDIOS BIOCOMPATIBLES.
Reutemann, Sofía1,a; Baravalle, Antonio 2,a; Lavaroni, Onelia 3,a; Zukas, Pedro4,b.
1
Pasante alumno.2 Pasante graduado.3 Profesora asociada.4 Bioquímico.
a
Universidad Nacional del Litoral (UNL). Facultad de Ciencias Veterinarias (FCV).
Departamento de Clínicas. Cátedra de Inmunología II.
b
Organización no gubernamental DONAR
[email protected]
Proyecto: Evaluación de la viabilidad de córneas porcinas conservadas en un
medio biocompatible desarrollado para su empleo en queratoplastía humana
(CAID 2006)
INTRODUCCIÓN
La queratoplastía o trasplante de córnea es una técnica quirúrgica, que consiste en la
sustitución de una córnea enferma por otra sana. Este procedimiento se compone de
cuatro etapas básicas: 1) enucleación del globo ocular in situ y posterior ablación del
tejido corneal 2) colocación del botón cornoescleral en medios de conservación 3)
evaluación de las características del tejido y 4) queratoplastía en el receptor. El
porcentaje de células endoteliales que se pierden durante las etapas de dicho proceso
esta en relación directa con la técnica quirúrgica y el medio de conservación utilizado3.
Objetivos generales
- Enuclear globos oculares (G.O) porcinos y posterior ablación del tejido corneal por
métodos quirúrgicos que permitan la obtención de un botón corneoescleral en óptimas
condiciones para su conservación en un medio biocompatible.
Objetivos específicos
- Obtener en frigoríficos G.O porcinos en forma completa junto con sus tejidos
periorbitarios por enucleación quirúrgica en un corto período de tiempo post mortem.
- Obtener en laboratorio, a partir de G.O enucleados recientemente, botones
corneoesclerales mediante métodos de ablación quirúrgica y posterior colocación de
aquellos que no presenten lesiones ni anormalidades morfológicas en medios de
conservación corneal.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se enuclearon 210 globos oculares de cerdos de frigoríficos locales. Los mismos fueron
obtenidos aproximadamente 15 min posteriores al sacrificio de los animales. Previo a la
enucleación se procedió a una inspección general del ojo de cerdo, con el objeto de
detectar anormalidades y lesiones. Luego se realizó una inspección local observando la
claridad de las córneas así como también la presencia de defectos epiteliales o cuerpos
extraños que comprometan la córnea.
Procedimiento de enucleación
Se prepararon recipientes estériles colocando gasas de algodón irrigadas con solución
salina balanceada adicionada con gentamicina (80 mg/l) como protector acolchado para
los G.O. Con pinzas diente de ratón se procedió a tomar el párpado superior realizando
una incisión desde el margen interno al externo de modo de exponer el G.O. Se realizó
una peritomía con bisturí tan próxima del limbo como fue posible en los 360 grados
alrededor del G.O evitando lesionar el tejido corneal y traccionar en forma excesiva
(Figura 1 y 2). Se seccionó la conjuntiva y la cápsula de Tenon con bisturí en los cuatro
cuadrantes para facilitar el acceso a los músculos oculares. Se tomó el músculo recto
lateral con pinza diente de ratón, cerca de su inserción, utilizándolo como guía para
mover el ojo. Se seccionaron los cuatro músculos rectos cerca de su inserción.
Localizado el músculo oblicuo mayor, fue seccionado, si no se lo había cortado ya con
los músculos rectos (Figura 3). Finalmente se ablacionó el nervio óptico (Figura 4). Se
levanto cuidadosamente el G.O de la órbita y se cortaron los tejidos residuales.
Posteriormente se efectuó el lavado e irrigación vigorosa con solución salina balanceada
estéril conteniendo gentamicina retirando todos los restos de tejidos y sangre. Los G.O
fueron colocados en recipientes estéril previamente acondicionados con la córnea hacia
arriba y gasas envolviendo el G.O. Estos recipientes fueron acondicionados con
refrigerantes para el traslado al laboratorio.
Procedimiento de ablación:
Se procedió a la separación del botón corneoescleral del resto de las estructuras oculares
en el laboratorio. Se prepararon los recipientes de medio de conservación, aflojando las
tapas y colocando gasas estériles por sobre sus tapas. Utilizando pinzas diente de ratón
se fijó el ojo sobre una superficie plana sosteniéndolo por la esclera y con la córnea
dirigida hacia arriba. Se realizo con bisturí una escleroctomía a 2 o 3 mm del limbo
hasta llegar al espacio supracoroideo (Figura 5). Utilizando tijeras Iris o bisturí se
completó la incisión alrededor del ojo manteniendo el borde escleral (Figura 6 y 7). Con
pinzas diente de ratón se fijó y rotó el ojo. Con pinzas de disección se separó
cuidadosamente el cuerpo ciliar y coroides dado que su contacto con el endotelio
corneal induce un daño considerable (Figura 8 y 9). Luego se separaron los tejidos
remanentes y el cristalino (Figura 10). Una vez separado el botón corneoescleral por
completo fue lavado con solucion fisiologica (Figura 11) y sumergido de inmediato en
el medio de conservación, debidamente rotulado, con la cara endotelial hacia arriba
(Figura 12).
RESULTADOS
De los 210 G.O porcinos obtenidos por enucleación quirúrgica fueron eliminados del
ensayo 40 (19,05%) por presentar: lesiones traumáticas, lesiones inducidas con el
instrumental quirúrgico durante la enucleación, cambios de color en los tejidos
periorbitarios, cambios de color o contenidos extraños en la cámara anterior, signos
inflamatorios en los tejidos periorbitarios, así como también aquellos que mostraban
opacidades, cicatrices corneales o cualquier tipo de alteración en la morfología de las
estructuras constituyentes. En los 170 G.O (80,95%) restantes se procedió a la ablación
quirúrgica de los botones corneoesclerales. Estos fueron inspeccionados en forma
macroscópica eliminándose del ensayo aquellos que presentaron lesiones traumáticas
por contacto con instrumental quirúrgico durante la ablación, contacto con estructuras
del cuerpo ciliar y córneas que sufrieron un vaciamiento brusco de la cámara anterior,
así como también aquellos que fueron sometidos a una excesiva tracción durante el
proceso de ablación. De esta manera fueron obtenidos 130 botones corneoesclerales
(61,9%) considerados en óptimas condiciónes para ser colocados en medios de
conservación biocompatibles.
DISCUSIÓN
La Eye Bank Association of America (EBAA) recomienda la obtención de córneas con
un tiempo post mortem no superior a seis horas para así garantizar la calidad del injerto
para su ulterior conservación4. No obstante, otros autores como Coster consideran un
límite máximo aceptable de doce horas en el tiempo post mortem del donante1, por esta
razón fueron realizadas las ablaciones en un tiempo no mayor a 3 hs post enucleación.
Fue tenido en cuenta que durante el proceso de ablación la córnea sufre un pequeño
estrés así como estiramiento de la capa de células endoteliales que puede dañarla
gravemente, por ello la técnica se centro en estos puntos y logro evitar el contacto del
instrumental con el endotelio así como también una tracción excesiva que pudiera
causar pliegues y sufrimientos corneal excesivo.
CONCLUSIONES
Se logró la enucleación de globos oculares porcinos y posterior ablación del tejido
corneal lo que permitió la obtención de un botón corneoescleral en óptimas condiciones
para su conservación en un medio biocompatible.