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SECCIÓN 5
Protocolo de transformación genética de lechuga (Lactuca sativa) var. Grand Rapids
Laura Radonic*, Nilda Lopez, Esteban Hopp y Marisa Lopez Bilbao
Instituto de Biotecnología, CNIA, INTA. Castelar, Buenos Aires.
*[email protected]
Un aspecto destacable de la lechuga (Lactuca sativa), además de su importancia en el
consumo y la producción, es que se la considera una especie modelo en biología
molecular y biotecnología de plantas. Este estatus se debe a que es “amigable” al
cultivo de tejidos, siendo uno de los primeros casos publicados en obtención de
plantas transgénicas. Además pertenece al grupo de transgénicas de segunda o
tercera generación, para la producción de edulcorantes o vacunas de origen vegetal.
En el Instituto de Biotecnología, INTA, comenzamos a trabajar en transformación
genética de lechuga siguiendo el protocolo de Curtis y col. (1994). Para la
transformación genética de la variedad Grand Rapids fue necesario realizar las
siguientes modificaciones: 1) adicionar al procedimiento de desinfección, un último
pasaje en una solución PPM (20 mL/L) con MgCl2 (0,05 mg/mL) a 4ºC en oscuridad
por una noche; 2) realizar la germinación en medio MS1/2 con 48 h de semioscuridad,
y luego pasarlas a la luz; 3) agregar un nuevo pasaje de cocultivo con el agregado de
acetosiringona (58,8 mg/L); 4) modificar el medio de cultivo utilizado en el primer paso
de regeneración (medio SIM) por el agregado de trans-zeatina (2 mg/L); 5) cambiar el
antibiótico Cefotaxima, utilizado para eliminar Agrobacterium en los diferentes medios
de regeneración, por Timentina y 6) comenzar a utilizar un medio adicionado con ANA
(0,1 mg/L) para favorecer el enraizamiento. Este trabajo se realizó con la cepa de
Agrobacterium LBA4404, llevando una construcción con el gen reportero uidA
(betaglucuronidasa) y el gen de selección nptII (resistencia a kanamicina).
Estas modificaciones permitieron tener un protocolo de transformación genética
eficiente y reproducible para esta variedad que actualmente se utiliza en forma
rutinaria en el laboratorio.