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Universidad Mariano Gálvez Facultad de Ciencias Médicas y de la Salud Carrera de Médico y Cirujano CULTIVO, AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE VIRUS PRACTICA No. 11 1. Introducción Los virus son entidades biológicas formadas básicamente por una cápside de proteínas que envuelve al ácido nucléico (ADN o ARN) y necesita de una célula huésped para replicarse. Pueden infectar células eucariotas (plantas, animales, hongos o protistas) o células procariotas (bacterias). Las infecciones virales en humanos y animales producen enfermedades como, gripe, varicela, sarampión, hepatitis B, fiebre amarilla, rabia, SIDA, etc., desencadenando una respuesta inmune en el organismo. Muchos virus pueden crecer en cultivos celulares o en huevos fertilizados (que contienen embrión viable) en condiciones estrictamente controladas. El laboratorio de diagnóstico intenta recuperar los virus a partir de muestras clínicas para establecer la etiología de las enfermedades. Los laboratorios de investigación cultivan virus como base para los análisis detallados de expresión y multiplicación viral. 2. Objetivos Que el estudiante: 1. Reconozca las diferentes técnicas microbiológicas para el cultivo, aislamiento e identificación de virus. 2. Haga uso adecuado de la información disponible en Internet para completar la información sobre el cultivo de virus. 3. Alcance En esta práctica, estudiante realizará una investigación sobre los métodos utilizados para el aislamiento y cultivo de virus en muestras de pacientes. Con el fin de conocer los métodos que actualmente se utilizan en distintos procedimientos de identificación viral. 4. Antecedentes Los virus son los agentes infecciosos más pequeños que existen (20-300 nm de diámetro) y contienen solo un tipo de ácido nucléico como genoma (ADN o ARN). Son parásitos intracelulares obligados (necesitan un huésped, ya que en vida libre no sobreviven), utilizando las enzimas y estructura de la célula huésped. El ciclo de reproducción dentro de la célula incluye las fases de adsorción, penetración, desnudamiento, multiplicación, ensamblaje y libreración. Para la visualización de las extructuras virales se utilizan microscopios electrónicos para visualizar las partículas de virus combinándolos con tintes de alto contraste a los electrones. Pag. 1/3 Universidad Mariano Gálvez Facultad de Ciencias Médicas y de la Salud Carrera de Médico y Cirujano GLOSARIO Adsorción: unión entre la cápside viral de proteínas y los receptores específicos en la superficie celular del huésped. Cápside: cubierta proteínica o envoltura que encierra el genoma de ácido nucléico. Desnudamiento: proceso en el cual el ácido nucleico del virus es liberado dentro de la célula. Ensamblaje: etapa de formación de la cápside viral y se asociación con el genoma viral. Envoltura: membrana que contienen los lípidos y rodea algunas partículas virales. Liberación. Los virus salen de la célula huésped por lisis o por gemación. Multiplicación. Es la biosíntesis de los elementos necesarios para la formación de nuevos virus. Nucelocápside: complejo proteína-ácido nucleico que representa la forma empacada del genoma viral. Penetración: La forma en la que el virus entra en la célula huésped varía dependiendo de la especie. Subunidad: cada polímero viral con un solo plegamiento. Unidades estructurales: proteína de los elementos que constituyen la cubierta. También se conocen como protómeros. Virón: partícula viral completa 5. Materiales y equipo - Sistema de Internet - Libros de texto - Computadoras - Alcohol al 70% - Guantes de látex - Cloro al 5% - Torundas de algodón 6. Procedimiento PARTE I. Apoyo de Internet - Consulte en Internet para realizar una investigación de las técnicas de cultivo, aislamiento e identificación de virus. - Realice un breve resumen de los antecedentes y los métodos actuales utilizados. - Tome los dibujos que sean necesarios para ilustrar su revisión bibliográfica. - Realice un cuadro comparativo Escriba la bibliografía como corresponde de acuerdo con las instrucciones del Manual de Laboratorio. Pag. 2/3 Universidad Mariano Gálvez Facultad de Ciencias Médicas y de la Salud Carrera de Médico y Cirujano 7. Cuidados y otros aspectos relevantes de seguridad - Lávese las manos después de realizar cualquier tarea dentro de laboratorio de microbiología. - No deje por ningún motivo cajas, tubos o cualquier otro material contaminado, en lugares que no corresponda al área de trabajo. - Descarte los materiales desechables en los contenedores para el efecto. - NINGÚN EQUIPO DE PROTECCIÓN SUSTITUYE EL CUIDO, ORDEN Y PRECAUCIÓN QUE DEBE TENER CADA ESTUDIANTE AL REALIZAR SU TRABAJO 8. Formato de presentación de resultados Realice un breve resumen donde explique de forma clara lo siguiente: 1. Cuadro en el que se incluya por lo menos tres diferentes técnicas para el cultivo, tres para el aislamiento y tres para la identificación viral. Debe incluir la descripción de la prueba (principio), ventajas y desventajas 2. Complete el reporte con sumario, marco teórico, discusión, conclusiones y referencias. TÉCNICAS DE CULTIVO, AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN VIRAL Descripción de la prueba Ventajas Desventaja Ilustración identificación Cultivo Aislamiento Nombre de la prueba 9. Bibliografía de referencia Brooks G. Butel J. Morse S. Microbiología médica de Jawetx, Melnick y Adelberg. Editorial El Manual Moderno 17 Ed. México 2002.844 p. Pag. 3/3