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XVIII Congreso Nacional de Ingeniería Bioquímica
VII Congreso Internacional de Ingeniería Bioquímica
X Jornadas Científicas de Biomedicina y Biotecnología Molecular
DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE BACTERIOCINAS DE Bacillus thuringiensis
CONTRA BACTERIAS PATÓGENAS IMPLEMENTANDO UN MÉTODO FLUOROGÉNICO
AUTORES: De la Fuente-Salcido, N.M:, López de la Crz, D., Alfaro Matínez, L.G., Barboza-Corona, J.E.
DIRECCIÓN: Universidad Autónoma de Coahuila, Escuela de Ciencias Biológicas, Torreón, Coahuila,
27440. Universidad de Guanajuato, DICIVA, Irapuato, Guanajuato, 36500.
Email: [email protected]
MATERIALES Y MÉTODOS
Bacillus thuringiensis subsp morrisoni, B.
thuringiensis subsp. kurstaki, B. thuringiensis
subsp kenyae), B. thuringiensis subsp
entomicidus y B. thuringiensis subsp tolworthi
producen Morricina 269, Kurstacina287,
Kenyacina
404,
Entomocina
420
y
Tolworthcina.
incremento del volumen de cada bacteriocina
probada, lo que hace notar el efecto de la
bacteriocina sobre la membrana de las bacterias
y la entrada del sulfato de berberina a las
células.
S. sonnei 0.70
120
120
Morricina
Kurstacina
Kenyacina
Entomocina
Tolworthcin
110
100
100
90
80
Fluorescencia (UF)
La actividad inhibitoria de las bacteriocinas se
ha determinado convencionalmente por
métodos enzimáticos y no enzimáticos, pero
alternativamente existen protocolos como el
método fluorogénico que proporciona una
opción para la rápida determinación de la
actividad de las bacteriocinas de Bacillus
thuringiensis (Bt) [De la Fuente-Salcido, 2007].
El propósito fue estandarizar el método
fluorogénico para determinar la actividad
antimicrobiana de las bacteriocinas sintetizadas
por cinco cepas de B. thuringiensis contra
bacterias gram-positivas y gram-negativas de
importancia en alimentos y salud pública.
Actividad (fluorescencia)
INTRODUCCIÓN
60
40
20
80
70
60
50
40
30
20
10
0
0
100
200
300
400
500
0
0
10
2
U (mm )
20
30
40
50
Bacteriocina (L)
Figura 1 Fluorescencia obtenida para Shigella
sonnei.
Existe una correlación entre los resultados
obtenidos por los métodos fluorogénico y de
disfusión en pozos, indicando la eficiencia de la
estandarización del método fluorogénico.
DISCUSIÓN
Utilizar diferente densidad óptica para grampositivas y gram-negativas por la diferencia de
composición de la membrana celular
proporciona resultados más eficientes.
DESARROLLO
CONCLUSIONES
Para el método fluorogénico se cultivó 21 cepas
y 20µL se mezclaron con cada (50, 40, 30, 20,
10µL) completando a 1000µL con berberina 24
mM. Se midió la fluorescencia en un
fluorometro Turner y se comparó la actividad
por difusión en pozos. Se observó por
microscopía la fluorescencia de berberina en B.
cereus y Salmonella sp.
Se estandarizó el método fluorogénico para
determinar la actividad antibacteriana de las
bacteriocinas de B. thuringiensis.
RESULTADOS
Se observó en las cepas una tendencia lineal
entre la fluorescencia determinada y el
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. De la Fuente-Salcido NM, SalcedoHernández R, Alanis-Guzmán G, Bideshi
DK, Barboza-Corona, JE. 2007. A new
rapid fluorogenic method for measuring
bacteriocin
activity.
Journal
of
Microbiological Mehods. 70: 196-199.
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