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CUANTIFICACION DE BACTERIAS NITRIFICANTES, DENITRIFICANTES,
FIJADORAS DE NITROGENOY HETEROTROFAS DE HUMEDALES ARTIFICIALES
SUB-SUPERFICIALES PARA EL TRATAMIENTO DE AGUA RESIDUAL.
ERICKA TRINIDAD GAITAN.
COD: 4801044.
UNIVERSIDAD DE PAMPLONA.
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS.
MICROBIOLOGIA CON ENFASIS EN ALIMENTOS.
PAMPLONA.
2006.
CUANTIFICACION DE BACTERIAS NITRIFICANTES, DENITRIFICANTES,
FIJADORAS DE NITROGENOY HETEROTROFAS DE HUMEDALES ARTIFICIALES
SUB-SUPERFICIALES PARA EL TRATAMIENTO DE AGUA RESIDUAL.
ERICKA TRINIDAD GAITAN.
COD: 4801044.
Trabajo de pasantía como requisito de graduación.
Irma Janeth Sanabria.
Directora de proyecto.
UNIVERSIDAD DE PAMPLONA.
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS.
MICROBIOLOGIA CON ENFASIS EN ALIMENTOS.
PAMPLONA.
2006.
2
CONTENIDO
Pág.
INTRODUCCIÓN…………………………………………………………… 4.
1. OBJETIVOS…………………………………………………………. 5.
2. JUSTIFICACIÓN……………………………………………………. 6.
3. MARCO REFERENCIAL…………………………………………… 7.
3.1. MARCO TEORICO………………………………………………… 7.
3.1.1. Microbiología del agua…………………………………….……. 7.
3.1.2. Agua residual…………………………………………………… 7.
3.1.3. Humedales……………………………………………………… 8.
3.1.4. Humedales sub-superficiales……………………………………. 10.
3.1.5. Ventajas de los humedales sub-superficiales…………………… 10.
3.1.6. Remoción biológica……………………………………………… 11.
3.1.7. Nitrificación biológica…………………………………………… 12.
3.1.8. Denitrificación…………………………………………………… 12.
3.1.9. Fijación biológica del nitrógeno molecular……………………… 13.
3.2. MARCO CONTEXTUAL………………………………………….. 14.
3.3. MARCO LEGAL…………………………………………………… 15.
4. METODOLOGÍA…………………………………………………... 16.
5. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES……………………………. 18.
6. RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS……………… 19.
7. CONCLUSIONES………………………………………………….. 27.
8. RECOMENDACIONES O SUGERENCIAS……………………… 28.
9. GLOSARIO……………………………………………………….... 29.
10. BIBLIOGRAFÍA…………………………………………………... 30.
11. ANEXOS. ………………………………………………………….. 32.
3
INTRODUCCIÓN
Este trabajo es una recopilación de toda la parte experimental y teórica desarrollada en el
laboratorio de microbiología ambiental de la Universidad del Valle en colaboración con el
proyecto “Modelación de los mecanismos involucrados en la remoción de nutrientes y
materia orgánica en humedales sub-superficiales para el tratamiento de aguas residuales
domesticas”, durante la segunda etapa del mismo.
En los últimos años se ha aumentado la contaminación por parte de la población,
incluyendo la contaminación de las fuentes de agua, situación que afecta la disponibilidad
de las mismas, estos hechos han llevado a la comunidad científica a la búsqueda de
soluciones para mantener un equilibrio en el medioambiente.
Actualmente se están realizando investigaciones para el modelamiento de humedales subsuperficiales en el trópico, por ser un método natural para el tratamiento de aguas
residuales domesticas. Los estudios buscan aportar información que ayude a la
optimización en la aplicación de estos tratamientos, ya que se trabaja con ellos pero como
un modelo de caja negra, debido a que no se han esclarecido completamente las
comunidades, poblaciones, e interacciones que allí se llevan a cabo.
Dentro de las actividades realizadas esta el recuento de los cuatro grupos bacterianos
(nitrificantes, denitrificantes, fijadoras de nitrógeno y heterótrofas), de los humedales
artificiales sub-superficiales para el tratamiento de agua residual de la planta ubicada en
Ginebra-Valle, y apoyo a las actividades desarrolladas en laboratorios de docencia.
En este informe, basado principalmente en el recuento de bacterias nitrificantes,
denitrificantes, fijadoras de nitrógeno, y heterótrofas de humedales sub-superficiales como
componentes fundamentales en la eliminación de contaminantes en los humedales
anteriormente mencionados, para el tratamiento de aguas residuales, se pretende aportar
datos que contribuyan a la elaboración de un modelo matemático.
La realización del proyecto fue a nivel de campo, con toma de muestras en la estación de
Ginebra –Valle, las cuales fueron procesadas en el laboratorio.
4
1. OBJETIVOS.
1.1. OBJETIVO GENERAL.
Incursionar en el campo investigativo, como apoyo en el área de microbiología para el
desarrollo del proyecto “Modelación de los mecanismos involucrados en la remoción de
nutrientes y materia orgánica en humedales sub-superficiales para el tratamiento de aguas
residuales domesticas”, durante la segunda etapa del mismo.
1.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS.
™ Evaluar y aplicar los protocolos propuestos para el recuento de bacterias
nitrificantes y fijadoras de nitrógeno, por la técnica de placa en superficie,
bacterias heterótrofas por la técnica de placa en profundidad, y bacterias
denitrificantes por el método del numero mas probable (NMP).
™ Proponer recomendaciones para optimizar los protocolos propuestos para el
aislamiento de las bacterias de interés.
™ Apoyar las actividades del laboratorio de docencia.
™ Actualizar la base de datos en formato PDF del grupo de investigación GAOX.
(Grupo de investigación en procesos avanzados de oxidación).
5
2. JUSTIFICACIÓN.
Con el crecimiento de la población mundial la demanda de agua para el consumo humano y
la contaminación de las fuentes de agua, hacen necesario aplicar métodos de tratamiento a
las aguas residuales domesticas e industriales para evitar la contaminación de los cuerpos
de agua a los cuales se vierten estas agua residuales para un mejor cuidado del ambiente y
del recurso hídrico.
En el área del tratamiento de aguas residuales hay varias opciones a la hora de escoger, sin
embargo estos métodos pueden llegar a ser demasiado costosos y aún si el beneficio es
grande, los costos son una limitante para la puesta en marcha de dichos tratamientos no
obstante se han venido estudiando métodos naturales, igualmente efectivos en el
tratamiento de las aguas residuales como son los humedales artificiales de flujo subsuperficial.
Este trabajo contribuye a la recopilación de datos, para el estudio y análisis de este tipo de
humedales, con el fin de usarlos en modelación, con miras a la aplicación a gran escala de
este tipo de tratamiento.
6
3. MARCO REFERENCIAL
3.1. MARCO TEORICO
3.1.1. Microbiología del agua. La hidrosfera es un hábitat adecuado para el crecimiento
microbiano, ya que contiene agua, que es necesaria para el metabolismo microbiano. En la
hidrosfera hay poblaciones microbianas autóctonas que comparten un número limitado de
características generales. Los microorganismos del agua pueden crecer a baja concentración
de nutrientes. En el medio acuático, la mayoría presentan movilidad por flagelos u otros
mecanismos.
La hidrosfera se divide en los hábitats de agua dulce (limnéticos) como lagos, estanques,
pantanos, fuentes, humedales, arroyos y ríos, y los hábitats marinos como océanos, mares y
estuarios. (Atlas, Richard, 2002). En el ambiente acuático, el papel de los microorganismos
en la degradación de materia orgánica refleja el proceso que ocurre en las plantas de
tratamiento de aguas residuales, pero además de esto los microorganismos en el ambiente
acuático pueden ser importantes como indicadores de contaminación. (Lester et al., 1999).
A diferencia de las plantas de tratamiento de aguas residuales, muchas aguas naturales
contienen muy poca materia orgánica y consecuentemente tienen baja densidad
microbiana. Si la biodegradación de compuestos específicos puede ocurrir esto transcurre
bajo condiciones de limitaciones severas de nutrientes. Las bajas concentraciones de
nutrientes podrían no permitir el crecimiento excepto a tasas muy bajas, esto podría
significar que el flujo de energía en el sistema es insuficiente para el mantenimiento de la
población microbiana (Atlas, Richard, 2002).
3.1.2. Agua residual. Los residuos líquidos se producen por las actividades humanas diarias
(aguas residuales domesticas) y por diferentes actividades agrícolas e industriales.
Mediante drenaje a través del alcantarillado, las descargas de residuos líquidos alcanzan las
masas naturales de aguas superficiales, como ríos, lagos y océanos. Estas mismas capas de
agua se utilizan de formas alternativas : como agua potable , para uso doméstico e
industrial y para el riego ; para el cultivo de peces y mariscos ; y para piscinas y otras
actividades de ocio ,por lo tanto es crucial mantener la calidad de esta agua naturales lo
mejor posible .El mantener la calidad de agua significa no sobrecargar con nutrientes
orgánicos e inorgánicos, o con sustancias toxicas, nocivas o inaceptables desde el punto de
vista estético .No deben alterase significativamente su oxigenación, temperatura, salinidad,
turbidez o pH.
Las aguas naturales tienen la capacidad inherente de auto purificación. Los
microorganismos acuáticos heterótrofos utilizan y mineralizan lo nutrientes orgánicos. El
amonio se nitrifica y junto con otros nutrientes inorgánicos es utilizado e inmovilizado por
las algas y plantas acuáticas superiores. Las bacteria patógenas se reducen y finalmente se
eliminan por las presiones de competencia y depredación ejercidas por poblaciones
7
acuáticas autóctonas es así como las aguas naturales pueden aceptar una cantidad moderada
de aguas residuales sin depurar, sin que se produzca un deterioro significativo de la
calidad.
El aumento en el volumen de las aguas residuales lleva a la búsqueda de nuevas soluciones
que lleven a un uso adecuado del agua natural y la posibilidad de reutilizar aguas
residuales domesticas tratadas (Atlas, Richard, 2002).
De los constituyentes enumerados en la tabla 1, los sólidos suspendidos, los compuestos
orgánicos biodegradables y los organismos patógenos son de mayor importancia, y por ello
la mayoría de instalaciones de manejo de aguas residuales son diseñadas para su remoción.
TABLA 1. Principales constituyentes de interés en el tratamiento de aguas residuales.
(Crites, Tchobanoglous, 2000).
Constituyentes
Sólidos suspendidos totales
Razón de interés
Formación de depósitos de lodos y
condiciones anaerobias.
Compuestos
orgánicos Agotamiento del oxigeno en fuentes
biodegradables
naturales y desarrollo de condiciones
sépticas.
Constituyentes
inorgánicos Constituyentes inorgánicos adicionados por
disueltos (Sólidos disueltos el uso.
totales )
Aplicaciones en la reutilización de aguas
residuales
Metales pesados
Constituyentes metálicos adicionados por el
uso.
Muchos metales se clasifican como
Polutantes de prioridad.
Nutrientes
Crecimiento excesivo de la vida acuática.
Indeseable, eutrofización, concentración de
nitratos en agua para consumo humano.
Patógenos
Transmisión de enfermedades.
Polutantes orgánicos prioritarios Sospechosos
de
ser
carcinogénicos,
mutagénicos, teratogenicos o de toxicidad
aguda alta. Muchos polutantes prioritarios
son resistentes
a los métodos de
tratamientos convencionales. (Conocidos
como contaminantes orgánicos refractarios.)
8
3.1.3. Humedales (wetlands). Los humedales son ambientes acuáticos de poca profundidad
en los que predominan las plantas emergentes.
Estos se desarrollan en condiciones climáticas diversas en zonas acuáticas superficiales con
escaso drenaje. Las plantas emergentes sirven como base para la clasificación de los
humedales.
Los humedales y sistemas acuáticos de tratamiento son aquellos que utilizan plantas
acuáticas y animales para el tratamiento de aguas residuales municipales e industriales.
Los humedales construidos son una alternativa natural a los métodos técnicos de
tratamiento de aguas de desecho (Atlas, Richard, 2002). Son sistemas pasivos de
depuración, se caracterizan por su simplicidad de operación, un bajo o nulo consumo
energético, una baja producción de residuos, un bajo impacto ambiental sonoro y una buena
integración al medio ambiente rural.
Hay varios tipos de humedales y sistemas acuáticos de tratamiento como:
Fig.1 Sistemas de humedales para el tratamiento de aguas residuales(A, estanque con
plantas libres flotantes; B, estanque de flujo sub-superficial horizontal con plantas
emergentes; C, humedal de flujo sub-superficial horizontal; D, humedal de flujo vertical).
(Stottmister ,2003)
Humedales artificiales de flujo libre
• Como pantanos o ciénagas.
• Con su vegetación parcialmente en el agua.
• Profundidad entre 100- 450 mm.
Humedales artificiales de flujo sub-superficial
• La vegetación emergente se planta en el medio que puede ser grava o arena. El
propósito de la vegetación es proveer oxigeno ala zona radicular y aumentar el
área superficial para el crecimiento biológico en la zona de las raíces.
9
•
Profundidad del lecho 0, 45 a 1 m. y tienen una pendiente característica desde 0 a
0,5 %.
Sistemas acuáticos de plantas flotantes
• Plantas flotantes suspendidas con raíces relativamente largas (Jacinto de agua), y la
raíz sirve como medio para el crecimiento de películas de bacterias.
• Lentejas de agua (sistemas de sombreado superficial).
Sistemas combinados
• Combinación de humedales y sistemas acuáticos para lograr objetivos en relación
a la calidad del agua.
Los humedales de flujo sub-superficial tienen ventajas respecto a los de flujo
superficial:
• Menor incidencia de mal olor debido a la naturaleza subterránea del flujo.
• Bajo riesgo de exposición directa de las personas y de aparición de insectos gracias
al flujo subterráneo.
• Protección térmica debido a la acumulación de restos vegetales y del flujo
subterráneo, ventaja interesante en los países nórdicos, donde la cobertura del hielo
y nieve invernal no afectan el proceso.
Entre lo inconvenientes cabe destacar:
•
•
•
Mayor coste de construcción debido fundamentalmente al material granular, el
coste puede incrementarse hasta un 30 %.
Menor valor como ecosistema para la vida salvaje debido a que el agua es
difícilmente accesible a la fauna.
Colmatacion del medio granular por grasas y aceites, aportes continuos de
materiales finos inertes.
Ventajas frente a los sistemas convencionales mecanizados:
•
•
•
•
•
Simplicidad en operación.Requieren un tiempo bajo de operarios y pocos equipos
electromecánicos; pueden ser explotados por operarios con poca experiencia.
Consumo energético mínimo o nulo.En general limitado al pre-tratamiento o
elevaciones.
Baja producción de residuos durante la operación del sistema, bajo costo de
explotación y mantenimiento en la operación del sistema.
Fiabilidad en la operación del sistema de tratamiento.
Con tiempos de permanencia hidráulica muy altos.
Bajo impacto ambiental.
10
•
Creación y restauración de zonas húmedas aptas para potenciar vida salvaje,
educación ambiental y zonas de recreo.
Principales inconvenientes frente a sistemas convencionales:
•
•
•
•
•
Requieren una superficie superior (20-80 veces superior ).
Coste de construcción similar, o incluso mayor.
Larga puesta en marcha, desde meses hasta un año.
Difíciles de diseñar bien dado al alto numero de procesos y mecanismos implicados
en la eliminación de contaminantes.
Pocos o ningún factor de control durante la operación.
Los humedales construidos e han utilizado para tratar una gamma amplia de aguas
residuales:
•
•
•
•
•
•
Aguas domésticas y urbanas.
Aguas industriales ,incluyendo fabricación del papel ,productos químicos
y farmacéuticos, cosméticos, alimentación, refinerías y mataderos
entre otros.
Lixiviados de vertederos.
Aguas de drenaje de extracciones mineras.
Aguas de escorrentía superficial agrícola y urbana.
Tratamiento de fangos de depuradora. (Atlas, Richard, 2002).
3.1.6. Remoción biológica. Dado que tanto el nitrógeno como el fósforo pueden causar
impacto en la calidad del agua que los recibe ,la descarga de uno o ambos constituyentes
debe ser controlada con frecuencia .El nitrógeno puede estar presente en las aguas
residuales de varias maneras por ejemplo en forma orgánica amoniaco , nitritos o nitratos.
El fósforo se encuentra en las aguas residuales en forma de fosfatos complejos los cuales
representan cerca de la mitad de los fosfatos de las aguas residuales municipales y
provienen del uso de estos materiales en detergentes sintéticos (Atlas et al., 2002).
La figura 2 muestra el flujo del nitrógeno en la tierra.
11
Figura 2. Ciclo del nitrógeno .Los pasos críticos en la fijación del nitrógeno, en la
nitrificación y en la denitrificación están mediados por las bacterias.
3.1.7. Nitrificación biológica .En la nitrificación biológica, el amoniaco se oxida en un
proceso de dos pasos: primero a nitritos luego a nitratos. En la conversión de amonio a
nitritos representada por la Nitrosomonas sp. ocurre el mayor consumo de oxígeno (4.33
mg O2 / mg N-NH4+ oxidado), además de que se generan iones hidrógeno, propiciando en
el cultivo un descenso del pH. En un primer paso, la enzima amonio mono-oxigenasa
(AMO) transforma al amonio en hidroxilamina, que posteriormente se convierte en nitrito,
mediante la hidroxilamina óxidoreductasa (HAO).
(AMO)
NH 4 + + H + + 2e - + O 2
NH 2 OH + H 2 O
(HAO)
NH 2 OH + H 2 O
NO 2 - + 5 H + + 4e -
La conversión de nitritos a nitratos esta representada por Nitrobacter sp. Mediante la
acción de la nitrito óxido-reductasa (NOR):
(NOR)
NO2- + H 2 O
NO3- + 2 H + + 2 e -
Las bacterias nitrificantes son quimiolitotrófas y utilizan la energía de la nitrificación para
fijar CO2, son microorganismos sensibles y extremadamente susceptibles a un amplio
rango de sustancias inhibitorias .A partir de estudios realizados tanto en laboratorio como
en plantas a gran escala se encontró que los siguientes factores afectan el proceso de
nitrificación:
•
Concentración de amonio y nitritos.
12
•
•
•
•
Relación DBO5 / TKN (ver glosario).
Concentración de oxigeno disuelto.
Temperatura.
pH
Las concentraciones de oxigeno disuelto que estén por encima de 1 mg /L son esenciales
para que ocurra el proceso de nitrificación. Si los niveles de oxigeno disuelto caen por
debajo de este valor el oxigeno se convierte en el nutriente limitante y la velocidad de
nitrificación disminuye o el proceso se detiene. Existe un rango óptimo entre pH 7.5 a 8.6,
pero los sistemas que están aclimatados a valores de pH menores llevan a cabo la
nitrificación con éxito (Atlas et al., 2002).
3.1.8. Denitrificación. Las bacterias denitrificantes obtienen energía para su crecimiento de
la conversión en nitrógeno gaseoso, pero requieren una fuente de carbono para la síntesis
celular .Dado que los efluentes nitrificados tienen, por lo general un bajo contenido de
materia carbonácea, se requiere con frecuencia una fuente externa de carbono. La
desnitrificación es un proceso respiratorio anaerobio heterotrófico del tipo anóxico, donde
la reducción del nitrato hasta N2 sigue una serie de pasos que involucran la actividad de
enzimas diferentes.
Nar
NO3Nitrato
Nir
Nor
→ NO2- → NO
nitrito
→
oxido nítrico
Nos
N2O
oxido nitroso
→ N2
nitrógeno gaseoso
Nar: nitrato reductasa; Nir: nitrito reductasa; Nor: oxido nítrico reductasa; Nos: oxido
nitroso reductasa.
Dentro de las variables que afectan el proceso de denitrificación se encuentran:
•
•
•
•
Concentración de nitratos
Concentración de carbono
Temperatura
pH
3.1.9. Fijación biológica de nitrógeno molecular. La fijación de nitrógeno molecular la
llevan a cabo diversos géneros de bacterias de vida libre, algunas de las cuales están
asociadas a la rizosfera y géneros de bacterias que forman asociaciones mutualisticas con
las plantas.
El proceso de reducción de nitrógeno a amoniaco es catalizado por la enzima nitrogenasa.
El complejo de la enzima nitrogenasa tiene dos coproteinas, una que contiene hierro y
molibdeno, y otra que solamente contiene hierro. La nitrogenasa es muy sensible al
oxigeno, necesita una presión parcial o muy baja de este elemento para poder realizar su
13
actividad. Los genes que determinan la fijación del nitrógeno, están sometidos a una
rigurosa regulación genética. Existe un sistema regulador muy complejo que controla la
expresión de numerosos genes nif necesarios para la síntesis de la nitrogenasa activa. La
fijación necesita además de la nitrogenasa, ATP, una ferrodopsina reducida y quizás otros
citrocromos y enzimas. La ecuación total de la reacción se muestra a continuación:
El amonio es el primer producto que se detecta en el proceso de fijación, y tal como lo
indica la DG`o positiva (DG`o = + 150 Kcal. /mol = 630 Kj / mol), la reacción requiere una
considerable entrada de energía. El amonio se asimila en forma de aminoácidos, que se
polimerizan, formando proteínas. (Atlas et al., 2002).
14
3.2. MARCO CONTEXTUAL
La universidad del valle , el instituto de investigación y desarrollo de agua potable
saneamiento básico y conservación del recurso hídrico (CINARA ), el departamento de
biología vegetal aplicada ,el instituto VON HUMBOLDT y la corporación autónoma
regional del Valle del Cauca (CVC) se unen para la realización del proyecto : “Modelación
de los mecanismos involucrados en la transformación y remoción de nutrientes y materia
orgánica en humedales artificiales sub-superficiales para el tratamiento de aguas residuales
domesticas “en el año 2003.
La investigación se centra en identificar los principales mecanismos involucrados en la
transformación de nutrientes y materia orgánica en un humedal artificial sub-superficial,
para el tratamiento de aguas residuales domésticas.
El trabajo es realizado en Santiago de Cali, Valle del Cauca, por el proyecto ya
especificado y atendiendo al problema de contaminación del recurso hídrico, y las
posibilidades de re-uso de aguas residuales domésticas tratadas.
En el laboratorio de Microbiología ambiental de la Universidad del Valle, son llevados a
cabo los recuentos de bacterias nitrificantes, denitrificantes, fijadoras de nitrógeno y
heterótrofas, con el propósito de conocer la proporción de las poblaciones ya mencionadas
presentes en la interacción planta-rizosfera.
15
3.3. MARCO LEGAL
La experimentación va dirigida al tratamiento de aguas residuales domesticas para la
realización de la modelación de los humedales en Ginebra (Valle ) y su potencialidad
para ser aplicados como solución al problema de contaminación del recurso hídrico tanto
para la región como para el país ,por lo cual se trae a colación los siguientes decretos :
DECRETO 1594 DEL 26 DE JUNIO DE 1984, del ministerio de agricultura y por el cual
se reglamenta parcialmente el titulo I de la ley 9 de 1979, axial como el capitulo II de titulo
VI parte III –Libro II y el titulo III de la parte III – Libro I del decreto – Ley 2811 de 1974
en cuanto a usos del agua y residuos líquidos.
GUIA TECNICA PARA EL DESARROLLO DE PROYECTOS DE REUSO DE AGUAS
RESIDUALES DOMESTICAS MUNICIPALES, 2001, Ministerio del medio ambiente,
dirección general ambiental sectorial ,grupo de gestión ambiental , urbano y salud .
16
4. METODOLOGÍA.
4.1. Descripción del sistema.
La planta de tratamiento, ubicada en el municipio de Ginebra (Valle del Cauca),
perteneciente a la empresa Acuavalle S.A., cuenta con tres humedales de flujo subsuperficial como tratamiento terciario de las aguas residuales domesticas de este
municipio, las aguas que llegan al sistema vienen de un tratamiento en la laguna
anerobia (fig.３）. En esta etapa del proyecto se trabajo con las siguientes cargas
hidráulicas:
• Humedal plantado con Heliconia psittacorum 600 ml /10 s.
• Humedal sin vegetación 200 ml / 10 s.
• Humedal plantado con Phragmites australis 400ml / 10 s.
Figura 3.
Vista de los humedales
Phrag: humedal plantado con Phragmites australis
SV: humedal sin vegetación
Caa: columna de agua afluente
Cae: columna de agua efluente
Hel: humedal plantado con Heliconia psittacorum
4.2. Toma de muestra
La toma de muestra de realizó desde octubre 13 hasta diciembre 13 de 2006(para un total
de 63 días).
Se tomaron dos tipos de muestra , las muestras de columna de agua ( muestra de agua
tomada de tubos PVC donde por medio de pequeños orificios fluye el agua, cada humedal
tiene la columna de agua del afluente y del efluente ) y las muestras de sustrato (muestra
de carbonilla cercana a la rizosfera de las plantas ), Los humedales fueron muestreados en
cuatro puntos ,.sustrato y columna de agua del afluente y del efluente, fueron escogidas tres
plantas aleatoriamente para la toma de muestra en cada punto para las muestras de
carbonilla, en el humedal sin vegetación las muestras de sustratos también se aleatorizaron,
se realizo el mismo procedimiento en cada recolección .
Las muestras fueron trasladadas al laboratorio de microbiología ambiental para realizar el
recuento de microorganismos.
17
A las muestras de columna de aguas se realizaron mediciones de oxigeno disuelto.
4.3. Recuento de microorganismos.
Se realizaron diluciones sucesivas de las muestras a partir de 1 g. de sustrato y 1 ml de agua
respectivamente en solución salina 0.85 % .las muestras de sustrato se maceraron para
desprender los microorganismos , para bacterias fijadoras de nitrógeno (medio para
bacterias fijadoras de nitrógeno, protocolos de laboratorio de microbiología ambiental) y
nitrificantes se sembraron por la técnica de placa en superficie en el medio autotrófico para
Nitrobacter 756 c (DSMZ), para ver la morfología típica (gotas de agua), se utilizo como
control positivo Nitrobacter winogradski DSM 10237 ,las bacterias heterótrofas se
sembraron por la técnica de placa profunda en agar nutritivo (Merck), y las bacterias
denitrificantes por el método del número mas probable en medio para bacterias
denitrificantes (Londoño, 2002)., determinado por la desaparición de nitrito y nitrato
revelado por el reactivo de Griess-Ilosvay tomando 50 ul de muestra a los cuales se
agregaron 50 ul del reactivo, se utilizo el medio de cultivo sin inocular como control
negativo para asegurar que las bacterias provienen de la muestra.
La máxima dilución fue de 10-7. Para el recuento de bacterias se utilizaron las cajas que
presentaron el crecimiento entre 15 y 300, con estos datos se calculo ufc/ml utilizando la
siguiente formula:
Ufc/ml =
numero de colonias * factor de dilución
__________________________________
ml sembrados en la placa
18
5. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
MES
AGOSTO
ACTIVIDAD \ SEMANA
2 3 4 5
Lectura de articulo introductoria
X X
Control T º de incubadoras
X
Organización manuales de equipos
X
Inducción
X X
Recolección de artículos para la
X X
base de datos.
Limpieza de vidrios zona de lavado
X
Limpieza de estantes
Apoyar las actividades del
laboratorio de docencia.
Lectura de la bitácora Norma
Perez.
Búsqueda de bibliografía
Planificación del trabajo
Revisión de 1ª parte del trabajo
Reactivar y conservar en glicerol
las cepas de E. coli, Salmonella sp
y Shigella sp.
Toma y procesamiento de muestra
Recuento de heterótrofas
Recuento de fijadoras, nitrificantes
y denitrificantes.
Organización de datos.
Realización de gráficos.
Elaboración del trabajo final.
SEPTIEMBRE OCTUBRE
1 2 3 4 1 2 3 4
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X X X
NOVIEMBRE
DICIEMBRE
1 2 3 4 5 1
2 3 4
ENERO
1
2
X X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X X
X X
X
X
19
X
6. RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS
Se observo el crecimiento de bacterias nitrificantes y fijadoras de nitrógeno,
caracterizado por la formación de colonias translucidas en forma de gota de agua en los
respectivos medios de cultivo. (Figuras 4,5 ,6 y 7).
Figuras 4.
Figura 5.
Crecimiento típico de bacterias nitrificantes en medio autotrófico para nitrobacter 756c
(DSMZ), las colonias se observan en los círculos negros.
El medio proporciona nitrito como fuente inorgánica de nitrógeno y las bacterias fijan
el CO2 como fuente de carbono, el crecimiento de estas bacterias varia de 13 a 14 días
debido a su metabolismo lento.
Figura 6.
Figura 7.
Bacterias fijadoras. Crecimiento típico de bacterias fijadoras en medio por componentes
para bacterias fijadoras.
El medio proporciona fuente de carbono orgánico e inorgánico sin proporcionar fuente
de nitrógeno solo los microorganismos capaces de tomar el nitrógeno atmosférico se
desarrollan en este medio.
20
Las bacterias denitrificantes se cultivaron en medios líquidos, se considero positivo con
la eliminación total del nitrógeno del medio de cultivo, revelado por la permanencia del
color amarillo del medio de cultivo, al adicionar el reactivo de griess ( figura 8 y 9).
Figura 8.
Figura 9.
Microplacas donde se revela la presencia de bacterias denitrificantes, los pozos que
luego de agregar el reactivo de griess (reactivo del nitrito) se tornaban de color rojo se
toma como negativo, si luego de la adición del reactivo no hay cambio de color se
agrega el polvo de zinc (detecta nitratos) si no hay cambio de color, se detecta la
desaparición de las formas nitrogenadas, la prueba es positiva para el crecimiento de
bacterias denitrificantes. En la figura 9 los 5 pozos en la parte inferior corresponden al
control negativo.
En esta investigación se cuantificaron las bacterias del ciclo del nitrógeno, ya que los
principales procesos para la remoción de nitrógeno de las aguas residuales se da
principalmente por nitrificación /denitrificación.
Las poblaciones encontradas para la zona cercana a la rizosfera varían entre 5,42 y
10,15 unidades logarítmicas para bacterias heterótrofas, 5,48 y 8,31 unidades
logarítmicas para fijadoras de nitrógeno, 4,02 y 7,97 unidades logarítmicas para
nitrificantes y <2,47 y 10,79 unidades logarítmicas para denitrificantes.
Se resalta la falta de datos en las gráficas correspondientes a las columnas de aguas.
Se esperaba encontrar diferencias en las poblaciones de los humedales con plantas y el
humedal sin vegetación, ya que el propósito de la vegetación es proveer oxigeno a
través de la zona radicular y aumentar el área superficial para el crecimiento biológico
en la zona de las raíces , sin embargo el transporte real de oxigeno hacia la zona
radicular y luego a la columna de agua es limitado , las raíces también liberan
sustancias orgánicas .Estas diferencias no son grandes ya que el humedal sin vegetación
presentaba crecimiento de pastos ( figura 13) , al igual que el humedal plantado con
Phragmites y Heliconia, que presentaban crecimiento de gramíneas (Leucaena sp.)
(figuras 13, 14,15 y 16). Estas plantas poseen una raíz densa y expansiva (figura 17.) y
en la rizosfera de estas plantas existen altas poblaciones de bacterias fijadoras y
nitrificantes.
21
b
12,00
10,00
Log UFC/ bacterias
log UFC/ Bacterias
a
Heterotrof
as
Fijadoras
8,00
6,00
Nitrificant
es
Denitrifica
ntes
4,00
2,00
0,00
13 oct
26 oct
9 nov
23 nov
6 dic
10,00
8,00
6,00
4,00
2,00
0,00
Heterotrofas
Fijadoras
Nitrificantes
Denitrificantes
13 oct 26 oct 9 nov
23
nov
fechas
13 dic
f echas
c
6 dic 13 dic
Log UFC/ bacterias
Log UFC/g-bact./ml
d
12,00
10,00
8,00
6,00
4,00
2,00
0,00
Heterotrofas
Fijadoras
nitrificantes
Denitrificantes
12,00
10,00
8,00
6,00
4,00
2,00
0,00
Heterotrofas
Fijadoras
Nitrificantes
denitrificantes
13 oct 26 oct
13 oct 26 oct 9 nov 23 nov 6 dic 13 dic
9 nov 23 nov
6 dic
13 dic
fechas
Fechas
Figura 10. Bacterias cuantificadas en los cuatro puntos del humedal plantado con Heliconia psittacorum. a. Rizosfera del afluente,
hay gran cantidad de bacterias denitrificantes en los tres primeros muestreos. b. Columna de agua afluente, el 27 de octubre
disminuye el oxigeno disuelto (figura 18), a su vez hay un descenso en el número de bacterias heterótrofas, nitrificantes y fijadoras
de nitrógeno, y un aumento de las bacterias denitrificantes. c. Rizosfera del efluente, en las últimas fechas se resalta el aumento de
bacterias heterótrofas. d. Columna de agua efluente. Los vacíos en b y d corresponden a las muestras que no fue posible tomar. En
todos los puntos de muestro se destaca la disminución del número de bacterias denitrificantes en las dos últimas fechas de muestreo.
22
a
b
12,00
10,00
12,00
het erot rofas
8,00
10,00
Heterotrof as
8,00
Fijadoras
6,00
Nit rif icant es
Fijadoras
6,00
4,00
Nit rif icant es
4,00
Denit rificant es
2,00
Denit rificant es
2,00
0,00
0,00
13 oct
13 oct
26 oct
9 nov
23 nov
6 dic
26 oct
9 nov
13 dic
23 nov
6 dic
13 dic
fechas
f echas
c
d
10,00
8,00
8,00
7,00
6,00
Heterotrof as
6,00
Fijadoras
Denit rificant es
2,00
26 oct
9 nov
23 nov
6 dic
fijadoras
Nitrificant es
Denitrificant es
1,00
0,00
0,00
13 oct
Het erotrof as
5,00
4,00
3,00
2,00
Nit rif icant es
4,00
10,00
9,00
13 dic
13 oct
Fechas
26 oct
9 nov
23 nov
6 dic
13 dic
f echas
Figura 11. Bacterias cuantificadas en los cuatro puntos del humedal sin vegetación. a. Rizosfera del afluente, presenta un aumento
de bacterias heterótrofas y denitrificantes el 23 de noviembre. b. columna de agua afluente, del 26 de octubre al 23 de noviembre se
da una leve disminución del oxigeno disuelto (figura 18), y un aumento de bacterias denitrificantes en esta fecha. La cantidad de
oxigeno empieza a aumentar el 6 de diciembre fecha en la cual empieza el descenso en el numero de bacterias denitrificantes. c.
Rizosfera del efluente, se aprecia un aumento de tres grupos bacterianos (heterótrofas, nitrificantes y fijadoras) el 23 de noviembre.
d. Columna de agua efluente, hay disminución del oxigeno disuelto desde el 26 de octubre hasta el 6 de diciembre (figura 18), sin
embargo las bacterias denitrificantes disminuyen a partir del 6 de diciembre. Los vacíos en b y d corresponden a las muestras que no
fue posible tomar. En todos los puntos de muestreo se destaca la disminución del número de bacterias denitrificantes en las dos
últimas fechas de muestreo.
23
b 10,00
9,00
a 12,00
8,00
8,00
Log UFC/g-bact./ml
Log UFC/g-bact./ml
10,00
Heterotrofas
Fijadoras
6,00
Nitrificantes
Denitrificantes
4,00
2,00
7,00
Nitrificantes
6,00
Fijadoras
5,00
Nitrificantes
4,00
denitrificantes
3,00
2,00
1,00
0,00
13 oct
26 oct
9 nov
23 nov
6 dic
13 dic
0,00
13 oct
Fechas
26 oct
9 nov
23 nov
6 dic
13 dic
fechas
c 12,00
d
8,00
Fijadoras
6,00
Nitrificantes
Denitrificantes
4,00
12,00
10,00
Heterotrofas
Log UFC/g-bact./ml
Log UFC/g-bact./ml
10,00
2,00
8,00
Heterotrofas
Fijadoras
6,00
Nitrificantes
4,00
Denitrificantes
2,00
0,00
13 oct
26 oct
9 nov
23 nov
6 dic
13 dic
0,00
Fechas
13 oct
26 oct
9 nov
23 nov
6 dic
13 dic
fechas
Figura 12. Bacterias cuantificadas en los cuatro puntos del humedal plantado con Phragmites australis. a. Rizosfera del afluente. b.
columna de agua afluente, en la muestra del 13 de octubre el oxigeno disuelto es de 6,3 mg/l (figura 18) y se obtuvo un alto número
de bacterias denitrificantes, para el 13 de diciembre el oxigeno disuelto fue 1,8 mg /l y las bacterias denitrificantes disminuyen, la
cual puede ser causada por otra variable. c. Rizosfera del efluente, se aprecia un aumento de bacterias heterótrofas, y una leve
disminución de bacterias nitrificantes y fijadoras. d. Columna de agua efluente, presenta un comportamiento similar al de la columna
de agua del afluente donde disminuye el numero de bacterias al igual que la cantidad de oxigeno disuelto. En todos los puntos de
muestreo se destaca la disminución del número de bacterias denitrificantes en las últimas fechas de muestreo.
24
Figura 13. Humedal sin vegetación, se
puede apreciar el crecimiento de pasto
(Cyperus rotundus) en todo el humedal.
Figura 16. Humedal plantado con
Heliconia, se observa la maleza.
Figura 17. Malezas encontradas en los
humedales, se aprecia el tamaño de la
raíz.
Figura 14. Humedal plantado con
Phragmites. Se puede ver la maleza
Figura 15. Humedal plantado con
Heliconia, se observa la maleza.
25
mg /l O2
Oxigeno disuelto en la columna de agua
8
7
6
5
4
3
2
1
0
13-oct 27-oct 10-nov 24-nov
HCAA
HCAE
SVCAA
SVCAE
FCAA
FCAE
8-dic
fecha
Figura 18. Datos de oxigeno disuelto tomado en la columna de agua.
HCAA: columna de agua Heliconia afluente. HCAE: columna de agua Heliconia
efluente. SVCAA: columna de agua humedal sin vegetación afluente. SVCAE:
columna de agua humedal sin vegetación efluente FCAA: columna de agua Phragmites
afluente. FCAE: columna de agua Phragmites efluente.
Los resultados de oxigeno disuelto reflejan los cambios producidos en el humedal a
causa de la poda realizada en los humedales el 27 de octubre, los restos vegetales no
son retirados de los humedales lo que incrementa el contenido de materia orgánica en
los humedales plantados.
El número de bacterias denitrificantes se redujo considerablemente en los dos últimos
muestreos, se debe tener en cuenta que las acondiciones de anoxia son proporcionadas
por el humedal sin embargo su disminución puede ser causa de la disponibilidad de
materia orgánica para la síntesis celular.
26
8. CONCLUSIONES
•
Los protocolos aplicados permiten la cuantificación de los grupos
bacterianos, en esta etapa fue necesario disminuir el número de diluciones,
para obtener una buena recuperación de bacterias fijadoras de nitrógeno.
•
De acuerdo a los resultados obtenidos las poblaciones bacterianas
cuantificadas, indican un alto potencial de la ocurrencia de los procesos de
remoción de nitrógeno, esto es importante en el tratamiento del agua residual
para la eliminación de las formas nitrogenadas presentes en estas aguas.
•
Las condiciones específicas para cada humedal marcan las diferencias en el
número de bacterias cuantificadas.
•
En esta etapa del proyecto no fue posible relacionar las variables físicoquímicas, con el aumento o disminución de las poblaciones, debido a la falta
de datos.
27
9. RECOMENDACIONES
Para encontrar los parámetros que expliquen las variaciones de los microorganismos se
recomienda:
•
Tener en cuenta los factores físico químicos (pH, Tº, DBO, concertación de
nitratos (NO3), nitritos (NO2)) que afectan cada grupo bacteriano y asegurar
la medición de dichos parámetros en cada muestreo.
•
Controlar en los humedales factores que pueden causar variaciones, como la
carga hidráulica y malezas.
28
10. GLOSARIO
Heterótrofo: microorganismo que sintetiza todo el material celular a partir de
compuestos orgánicos.
Humedal artificial: sistema construido que replica las características y capacidad de
reciclaje de aguas de los sistemas pantanosos naturales.
Modelación: es la habilidad para describir la situación problemática que confronta un
analista. Puede expresarse a través de matemáticas, símbolos o palabras, pero es
esencialmente una descripción de entidades y las relaciones entre ellas.
Polutante: Es una sustancia que causa contaminación y por definición puede causar
algún efecto peligroso.
Quimiolitótrofo: Microorganismos capaces de usar el CO , CO2 o carbonatos como
fuente de carbono para la biosíntesis celular y que derivan energía de la oxidación de
componentes inorgánicos.
Rizosfera: es la parte del suelo inmediata a las raíces, tal que al extraer una raíz, es
aquella porción de tierra que resta adherida a la misma.
TKN: Método analítico que determina el nitrógeno total orgánico y el amonio.
DQO :Medida del oxigeno requerido para oxidar todos los compuestos presentes en el
agua ,tanto orgánicos como inorgánicos ,por la acción de agentes fuertemente oxidantes
en medio ácido La materia orgánica se oxida hasta dióxido de carbono y agua ,mientras
el nitrógeno se convierte en amoniaco.
29
11. BIBLIOGRAFÍA
ATLAS, M. RONALD; BARTHA, RICHARD, 2002.Ecología microbiana y
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31
12. ANEXOS
Anexo 1. TABLAS DE RESULTADOS NMP
13 octubre/2006
HAR
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
No.
Positivo
4
3
1
No.
Negativo
1
2
4
No.
Tubos
5
5
5
Vol.Inoc.
0,00001
0,000001
1E-07
x
338330,0605
L
0
R
0
P
5,94699
Pop. Esta
3,38E+09
HE..
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,01
0,001
0,0001
No. Positivo
4
1
1
No. Negativo
1
4
4
No.
Tubos
5
5
5
Vol.Inoc.
0,001
0,0001
0,00001
x
2116,250209
L
R
P
0,01 0,01 4706,16
Pop.
Esta
2,12E+05
No. Positivo
3
3
0
No. Negativo
2
2
5
No.
Tubos
5
5
5
Vol.Inoc.
0,00001
0,000001
1E-07
x
167509,8202
L
0
R
0
P
1047,05
Pop. Esta
1,68E+09
No. Positivo
3
2
0
No. Negativo
2
3
5
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
136070,3443
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
56361,4
Pop. Esta
1,36E+09
HE…
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
HER
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
32
SVAR
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
No. Positivo
2
5
4
No. Negativo
3
0
1
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
281906,9398
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
Pop. Esta
1,8E-10 2,82E+09
SVER
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
No. Positivo
3
3
2
No. Negativo
2
2
3
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
237833,3973
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
0,01121
Pop. Esta
2,38E+09
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
No. Positivo
5
5
5
No. Negativo
0
0
0
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
6161015,545
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
0,02037
Pop. Esta
6,16E+10
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
No. Positivo
3
1
2
No. Negativo
2
4
3
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
169841,6931
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
16,1612
Pop. Esta
1,70E+09
Dilucion
1,00E-04
1,00E-05
1,00E-06
No. Positivo
3
3
2
No. Negativo
2
2
3
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
1,00E-05 246440,6218
1,00E-06
1,00E-07
L
0
R
0
P
0,01118
Pop. Esta
2,46E+09
FAR
Tubos
1
2
3
FA
Tubos
1
2
3
FE
Tubos
1
2
3
33
FER
Tubos
1
2
3
Dilucion
1,00E-04
1,00E-05
1,00E-06
No. Positivo
3
1
2
No. Negativo
2
4
3
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
1,00E-05 170044,029
1,00E-06
1,00E-07
L
0
R
0
P
16,1595
Pop. Esta
1,70E+09
No. Positivo
5
4
2
No. Negativo
0
1
3
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
1860235,882
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
2,34819
Pop. Esta
1,86E+10
No. Positivo
5
3
0
No. Negativo
0
2
5
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,001
7921,74367
0,0001
0,00001
L
R
P
0,01 0,01 12996,9
Pop. Esta
7,92E+05
No. Positivo
4
1
0
No. Negativo
1
4
5
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
167421,2294
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
1229643
Pop. Esta
1,67E+09
No. Positivo
3
3
2
No. Negativo
2
2
3
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
234824,3841
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
0,01119
Pop. Esta
2,35E+09
26 de octubre/2006
HAR
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
HCAA
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,01
0,001
0,0001
HCAE
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
HER
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
34
SVAR
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,01
0,001
0,0001
No. Positivo
5
3
0
No. Negativo
0
2
5
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,001
7905,288903
0,0001
0,00001
L
R
P
0,01 0,01 12996,8
Pop. Esta
7,91E+05
No. Positivo
2
5
1
No. Negativo
3
0
4
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
199633,1123
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
0,00687
Pop. Esta
2,00E+09
No. Positivo
4
3
0
No. Negativo
1
2
5
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
267688,1805
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
988,109
Pop. Esta
2,68E+09
No. Positivo
4
2
2
No. Negativo
1
3
3
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
313832,7897
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
0,57851
Pop. Esta
3,14E+09
No. Positivo
4
4
3
No. Negativo
1
1
2
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
525359,6651
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
1E-05
Pop. Esta
5,25E+09
SVCAA
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
SVCAE
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
SVER
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
FAR
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
35
FER
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
No. Positivo
5
1
0
No. Negativo
0
4
5
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
362498,1689
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
2155894
Pop. Esta
3,62E+09
No. Positivo
5
4
2
No. Negativo
0
1
3
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
1606747,227
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
2,00618
Pop. Esta
1,61E+10
No. Positivo
3
1
1
No. Negativo
2
4
4
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
138063,9246
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
8473,45
Pop. Esta
1,38E+09
No. Positivo
3
1
0
No. Negativo
2
4
5
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
107819,6945
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
3469815
Pop. Esta
1,08E+09
No. Positivo
3
3
1
No. Negativo
2
2
4
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
203904,3123
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
3,9896
9 noviembre/2006
HAR
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
HER
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
SVAR
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
SVER
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
36
Pop. Esta
2,04E+09
FAR
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
No. Positivo
3
5
2
No. Negativo
2
0
3
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
321054,2371
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
Pop. Esta
2,9E-05 3,21E+09
No. Positivo
4
4
2
No. Negativo
1
1
3
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
453858,6073
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
0,00178
No. Positivo
4
4
4
No. Negativo
1
1
1
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
662897,9569
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
Pop. Esta
7,4E-08 6,63E+09
No. Positivo
1
2
1
No. Negativo
4
3
4
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
82610,97107
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
2407,82
No. Positivo
3
4
4
No. Negativo
2
1
1
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
344843,555
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
6E-09
FER
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
Pop. Esta
4,54E+09
23 de noviembre/2006
HAR
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
HCAA
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
Pop. Esta
8,26E+08
HCAE
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
37
Pop. Esta
3,45E+09
HER
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
No. Positivo
3
3
3
No. Negativo
2
2
2
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
267350,9904
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
Pop. Esta
3,2E-05 2,67E+09
No. Positivo
4
3
1
No. Negativo
1
2
4
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc.
0,00001
0,000001
1E-07
x
308727,0864
L
0
R
0
P
5,9209
Pop. Esta
3,09E+09
No. Positivo
5
4
3
No. Negativo
0
1
2
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc.
0,00001
0,000001
1E-07
x
1994980,701
L
0
R
0
P
0,06017
Pop. Esta
1,99E+10
No. Positivo
5
1
0
No. Negativo
0
4
5
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,0001
32621,21557
0,00001
0,000001
L
0
R
0
P
2187764
Pop. Esta
3,26E+07
No. Positivo
3
2
1
No. Negativo
2
3
4
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
171545,8047
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
174,597
Pop. Esta
1,72E+09
SVAR
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
SVCAA
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
SVCAE
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,001
0,0001
0,00001
SVER
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
38
FAR
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
No. Positivo
5
5
5
No. Negativo
0
0
0
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
4829172,72
0,000001
1E-07
L
0
R
0
P
0,00792
Pop. Esta
4,83E+10
No. Positivo
5
5
0
No. Negativo
0
0
5
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc.
0,001
0,0001
0,00001
L
R
P
0,01 0,01 2695,83
Pop. Esta
2,39E+06
No. Positivo
5
5
5
No. Negativo
0
0
0
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,00001
4829172,72
0,000001
1E-07
L
0
P
0,00792
Pop. Esta
4,83E+10
No. Positivo
2
0
0
No. Negativo
3
5
5
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,001
446,8615158
0,0001
0,00001
L
R
P
0,01 0,01 2E+09
Pop. Esta
4,47E+04
No. Positivo
1
1
1
No. Negativo
4
4
4
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,001
606,7688063
0,0001
0,00001
L
R
P
0,01 0,01 261633
Pop. Esta
6,07E+04
FCAE
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,01
0,001
0,0001
x
23888,07491
FER
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,0001
0,00001
0,000001
6
R
0
DIC / 06
HAR
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,01
0,001
0,0001
HER
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,01
0,001
0,0001
39
Punto
HCAA
SVCAA
SVCAE
SVER
FAR
SVAR
Tubos
1
2
3
nmp
000
000
000
000
000
Dilucion
0,01
0,001
0,0001
Pop.esta
<3 E 2
<3 E 2
<3 E 2
<3 E 2
<3 E 2
No. Positivo
2
1
0
No. Negativo
3
4
5
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,001
683,9156901
0,0001
0,00001
L
R
P
0,01 0,01 2,3E+07
Pop. Esta
6,84E+04
No. Positivo
2
2
1
No. Negativo
3
3
4
No. Tubos
5
5
5
Vol.Inoc. x
0,001
1176,082853
0,0001
0,00001
L
R
P
0,01 0,01 505,624
Pop. Esta
1,18E+05
FER
Tubos
1
2
3
Dilucion
0,01
0,001
0,0001
13 dic /06
Punto
HAR
HCAA
HCAE
HER
SVAR
SVCAA
SVCAE
SVER
FAR
FCAA
FCAE
FER
nmp
000
000
000
000
000
000
000
000
000
000
000
000
Pop. esta
<3 E 2
<3 E 2
<3 E 2
<3 E 2
<3 E 2
<3 E 2
<3 E 2
<3 E 2
<3 E 2
<3 E 2
<3 E 2
<3 E 2
40
ANEXO 2
TABLAS DE RESULTADOS DE LA CUANTIFICACION DE BACTERIAS
heterotrofas
HAR
HCAA
HCAE
HER
13-Oct
7,03
8,41
6,29
6,81
fijadoras
HAR
HCAA
HCAE
HER
13 oct
nitrificantes
HAR
HCAA
HCAE
HER
13 oct
26-Oct
5,42
6,12
4,30
7,19
26 oct
6,18
6,64
6,20
6,66
Denitrificantes
HAR
HCAA
HCAE
HER
heterotrofas
SVAR
SVCAA
SVCAE
SVER
13 oct
fijadoras
SVAR
SVCAA
SVCAE
SVER
13 oct
nitrificantes
SVAR
SVCAA
SVCAE
SVER
13 oct
9 nov
26 oct
5,70
4,53
5,20
5,35
9,53
5,33
9,23
9,13
10,27
5,90
9,22
9,37
26 oct
5,78
10,21
9,14
9 nov
6,34
26 oct
4,98
9 nov
5,00
26 oct
9 nov
23 nov
9,03
9,31
41
4,30
4,32
4,06
4,20
4,65 < 2,47
< 2,47
< 2,47
4,78 < 2,47
7,97
6 dic
13 dic
6,60
8,35
8,49
7,62
6 dic
8,98
6,79
8,16
6,84
13 dic
6,60
6,20
4,60
5,52
6 dic
4,51
6,39
3,94
7,57
5,06
5,90
9,30
9,43
9,50
9,82
8,92 < 2,47
9,54
9,43
23 nov
5,05
13 dic
5,95
4,70
6,32
7,86
4,93
8,18
5,95
4,85
3,78
5,24
6,11
6 dic
23 nov
5,95
6,69
5,50
5,55
5,65
8,31
10,44
8,57
6,39
9,01
5,64
13 dic
7,35
5,94
4,41
5,61
4,19
5,15
23 nov
5,83
13-Dic
6,40
5,70
6,48
10,15
9,72
6 dic
23 nov
5,45
6,11
5,48
6,60
5,93
06-Dic
7,30
6,90
7,59
5,72
5,16
6,38
6,11
9 nov
26 oct
6,77
9,38
23 nov
6,13
6,45
6,77
6,57
7,04
23-Nov
8,30
8,66
6,53
10,01
6,37
9 nov
5,48
4,95
5,36
5,40
9,45
6,13
6,72
5,00
5,40
6,26
8,48
Denitrificant. 13 oct
SVAR
SVCAA
SVCAE
SVER
09-Nov
6,19
6 dic
9,49
10,30 < 2,47
7,51 < 2,47
9,24 < 2,47
5,48
6,78
7,33
6,23
13 dic
5,76
4,60
4,11
4,64
13 dic
4,84 < 2,47
< 2,47
< 2,47
< 2,47
4,16
4,45
5,06
4,02
heterotrofas
FAR
FCAA
FCAE
FER
13 oct
fijadoras
FAR
FCAA
FCAE
FER
13 oct
nitrificantes
FAR
FCAA
FCAE
FER
13 oct
26 oct
7,74
6,90
9,09
7,45
9 nov
denitrificant. 13 oct
26 oct
FAR
10,79
FCAA
9,23
FCAE
9,39
FER
9,23
13 dic
7,27
7,81
7,77
8,05
6,79
9,05
7,85
9 nov
23 nov
6 dic
7,45
7,67
7,46
7,73
6,60
6,41
7,65
6,85
9 nov
23 nov
6 dic
5,38
6,32
6,63
6,26
5,54
3,80
4,42
5,15
23 nov
7,80
6,65
7,34
7,62
13 dic
5,98
9 nov
6,71
9,35
10,22
7,84
13 dic
8,31
26 oct
6,80
5,66
5,60
6,48
6 dic
7,75
26 oct
7,28
6,65
6,36
7,33
23 nov
9,53
9,72
9,51
6 dic
10,68 < 2,47
9,56
9,66
6,38
10,68
4,61
4,18
4,35
5,48
13 dic
< 2,47
< 2,47
< 2,47
5,07 < 2,47
ANEXO 4. Valores de oxigeno disuelto tomado en las columnas de agua.
Punto
HCAA
HCAE
SVCAA
SVCAE
FCAA
FCAE
13-Oct
26-Oct
23-Nov
06-Dic
13-Dic
1,6
2,7
6,3
5,2
0,7
6,9
1,5
3,2
-
6,8
1,1
1,1
1,2
1,7
4,7
0,6
0,7
-
1,3
1,4
1,2
2,3
1,8
1,6
El guión (-), representa las muestras no tomadas por falta de agua en las columnas.
42