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INSTRUCCIONES DE USO Revisión 1 Feb.2014 BASE DE AGAR COLUMBIA Base de Agar Columbia presentación 500 gramos, 5, 25, 50 kilos. Catálogo 1104 Agar Sangre (Base de Agar Columbia) presentación placas de 90 mm Caja 20 unidades. Catálogo 912 Agar Chocolate (Base de Agar Columbia) presentación Frascos 100 ml Caja 12 unidades. Catálogo 5106 USO PREVISTO Base de Agar Columbia está recomendada para el aislamiento y cultivo de microorganismos exigentes y para la determinación de reacciones hemolíticas a partir de muestras clínicas. FORMULA EN g/l Digerido Pancreático Caseína 10.00 Digerido Pancreático Corazón Extracto Levadura 5.00 Almidón maíz Digerido Péptico Carne 5.00 Agar Bacteriológico Cloruro Sódico 5.00 3.00 1.00 13.50 Final pH 7.3 ± 0.2 a 25ºC Staphylococcus aureus ATCC 25923 PREPARACION Base de Agar Columbia presentación 500 gramos, 5, 25, 50 kilos. Catálogo 1104 (Medio deshidratado) Suspender 42.5 gramos del medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien. Calentar agitando frecuentemente y hervir durante un minuto. Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar a en autoclave 121°C durante 15 minutos. Generalmente el medio se enriquece con sangre desfibrinada estéril, suero o algún otro material. Enfriar a 45-50°C y añadir asépticamente el 5-10% de sangre desfibrinada estéril, homogenizar evitando la formación de burbujas y verter en placas Petri. Se puede preparar Agar chocolate por calentamiento a 80°C, después de añadir la sangre. El color del medio preparado sin sangre es ámbar claro ligeramente opalescente. Las placas preparadas deben almacenarse entre 8-15°C. El color del medio preparado con sangre es opaco rojo cereza. El medio deshidratado debe ser homogéneo, libre de floculos y de color beige claro. Si hay algún cambio físico no utilizar el medio. Si se desea hacer el medio más selectivo se pueden añadir los siguientes suplementos CNA Suplemento (Cat. 6016) para aislamiento de Estafilococos, Estreptococos y Neumococos Brucella Suplemento (Cat. 6017) para aislamiento de Brucella Agar Sangre (Base de Agar Columbia) presentación placas de 90 mm Caja 20 unidades. Catálogo 912 (Medio preparado). Listo para su uso Agar Chocolate (Base de Agar Columbia) Frascos 100 ml Caja 12 unidades. Catálogo 5106. Medio preparado Listo para su uso (fundir y dispensar en placas) PRINCIPIOS Y APLICACIÓN BASE AGAR COLUMBIA es un medio altamente nutritivo para el cultivo de microorganismos exigentes especialmente cuando se utiliza como base para chocolate. Puede ser utilizado para aislamiento selectivo, por la adición de agentes antimicrobianos. La mayoría de las bacterias patógenas comunes crecen bien en este medio sin la adición de sangre. El Digerido Pancreático de Caseína, Digerido péptico de carne y Digerido pancreático de corazón, aportan nitrógeno vitaminas minerales y amino ácidos esenciales para el crecimiento; el extracto de Levadura y el Almidón de maíz son fuentes de vitaminas, particularmente del grupo B esencial para el crecimiento bacteriano; el Cloruro sódico mantiene el 1 LABORATORIOS CONDA, S.A. www.condalab.com balance osmótico. El Agar bacteriológico es el agente solidificante. La sangre es otra fuente factores de crecimiento para los microorganismos y es la base para determinar las reacciones hemolíticas. Con la adición de 5-10% de sangre desfibrinada estéril y especialmente con el suplemento Polienriquecimiento (Cat.6011) y el suplemento VCN (Cat.6013), el Base de Agar Columbia llega a ser un excelente Agar chocolate que se puede utilizar para el aislamiento de patógenos como Neisseria, Gonococos y Meningococos, mientras el paciente está recibiendo tratamiento con antibióticos. TIPO DE MUESTRAS Sangre La recolección, el manejo y el procesamiento de las muestras se llevan a cabo según Recomendaciones y Standards en Microbiología Clínica. PROCEDIMIENTO 1. Inocular en superficie. Estrías paralelas con el asa o hisopo. 2. Incubar en condiciones aeróbicas a 35 ± 2°C durante 18-72 horas. 3. Lectura e interpretación de los resultados Tipos de Hemolisis 1. Alpha-hemolisis: decoloración verdosa de medio 2 .Beta-hemolisis: zona clara alrededor de la colonia 3. Gamma-hemolisis: sin cambio CONTROL MICROBIOLOGICO Los siguientes resultados, fueron obtenidos en el desarrollo del medio a partir de cepas patrón con el 7% de sangre desfibrinada de carnero, después de incubación a temperatura de 35 ± 2°C y observados después de 18-72 horas. Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inoculo cfu/ml 103-105 Desarrollo Bueno Recuperación % ≥70 Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 103-105 Bueno ≥70 - Streptococcus pneumoniae ATCC 6303 103-105 Bueno ≥70 Alpha Streptococcus pyogenes ATCC 19615 103-105 Bueno ≥70 Beta Microorganismos Hemolisis Beta BIBLIOGRAFIA Ellner, Stossel, Drakeford and Vasi. AM J. Clin. Path. 45:502-504. 1966. European Pharmacopoeia. 6.5 Diagnostico in vitro Solo para uso profesional Ver indicaciones generales de uso y ficha de seguridad www.condalab.com EP 25ºC C ALMACENAMIENTO Una vez abierto guardar el medio cerrado para evitar la hidratación Utilizable hasta la fecha de caducidad. 2ºC Placas preparadas almacenar entre 8-15°C. Frascos preparados almacenar entre 2-8°C Utilizable hasta la fecha de caducidad. Laboratorios Conda S.A C/ La Forja 9 28850 Torrejón de Ardoz Madrid, España 2 LABORATORIOS CONDA, S.A. www.condalab.com