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Trabajo Práctico Nº 5
Construcción de ADN recombinante mediante simulación
OBJETIVOS:
Mediante una simulación, se construirá un ADN recombinante, utilizando un plásmido de una bacteria y un
gen de interés que interese insertar. Se pondrán en práctica los conocimientos adquiridos sobre las técnicas
de actuación de las enzimas de restricción.
MATERIALES:
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Fotocopias con ADN del plásmido (figura 1)
Fotocopias con ADN que contenga el gen que codifica la hormona del crecimiento.(figura 2)
Fotocopia con distintos enzimas de restricción (figura 3)
Fotocopia con dibujos de bacterias para rellenar con el plásmido resultante (figura 4)
Fotocopia con el medio y el antibiótico para poner en las cajas de Petri donde crecerán las bacterias
(figura 5)
Varios modelos para simular las enzimas ADN- ligasas. (clip, cinta adhesiva, etc).
INSTRUCCIONES DE USO:
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Recortar los trozos de ADN del plásmido y unirlos con cinta adhesiva para formar una
estructura circular que simule el plásmido. Fotocopia 1.
Haz lo mismo con el ADN celular que contiene el gen de la insulina. Une los distintos
trozos pero no lo cierres. Fotocopia 2
Recorta los diferentes enzimas de restricción. Fotocopia 3.
Desliza ahora las enzimas de restricción en paralelo sobre el ADN del plásmido, hasta que
encuentres los lugares en los que coincida la secuencia del plásmido con la secuencia
reconocida por la enzima. Ayúdate viendo esta animación. Figura 6
Fig. 6
Fig. 7
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Haz un diagrama en el que se representen los siguientes datos:
o lugares de actuación de cada enzima de restricción
o lugar de inicio de replicación del plásmido
o lugares de resistencia a antibióticos.
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El diagrama debe quedar similar al de la figura 7.
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Localiza del mismo modo, los lugares de restricción en el ADN de la célula que da el gen
de la insulina.
Selecciona la enzima adecuada. Recuerda que la enzima debe cumplir estas condiciones:
1. Que se consiga un fragmento de ADN que contenga entero el gen de la insulina.
2. Que rompa el plásmido y se pueda obtener un fragmento que contenga el lugar de
inicio de la replicación y al menos un factor de resistencia a antibióticos.
Realiza las roturas apropiadas en el ADN celular y en el plásmido.
Traslada el fragmento del ADN celular que contiene el gen de la insulina al fragmento del
plásmido seleccionado. Figura 8
FIGURA 8
FIGURA 9
Une los fragmentos con una ADN-ligasa. Ya tienes el plásmido recombinado. FIGURA 9.
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El siguiente paso es introducirlo en una bacteria para transformarla. Esto se consigue
mediante varios procesos físicos y químicos, que también se pueden simular lúdicamente
en esta experiencia.
Por último, se preparan las cajas de Petri y se ponen las bacterias transformadas. Puede
ser similar a esto.(FIGURA 10)
FIGURA 1
FIGURA 2
FIGURA 3
FIGURA 4
FIGURA 5