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EL CARIOTIPO 1. 2. 3. 4. 5. Introducción Metodología Clasificación de los cromosomas Técnicas de bandeado cromosómico Citogenética molecular Metodología EL CARIOTIPO Tejido sólido Metodología EL CARIOTIPO Sangre periférica Fitohemaglutinina G-banding EL CARIOTIPO Metodología Metafase humana teñida con Giemsa EL CARIOTIPO Clasificación de los cromosomas Los cromosomas se clasifican por pares de homólogos y se ordenan atendiendo a: • Tamaño • Posición del centrómero (constricción primaria) • Presencia de constricciones secundarias En el cariotipo humano los cromosomas se clasifican en siete grupos: A, B, C, D, E, F y G EL CARIOTIPO Clasificación de los cromosomas Cariotipo estándar EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico 1. Bandas que marcan todo el cromosoma Bandas Q Bandas G Bandas R Bandas G de alta resolución 2. Bandas que marcan regiones específicas Bandas C Bandas T Bandas NOR EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico Bandas que marcan todo el cromosoma Bandas Q ADN rico en AT Bandas Q Quinacrina patrón similar a las bandas G se observan con el microscopio de fluorescencia EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico Bandas que marcan todo el cromosoma Bandas G ADN rico en AT Resultan de interacciones del ADN y proteínas con los colorantes que componen la tinción Giemsa. Se desnaturalizan proteínas con tripsina. EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico Bandas-G Los cromosomas se tiñen en zonas oscuras y claras • Las bandas G oscuras son regiones de replicación tardía en la fase S, contienen cromatina más condensada • Las bandas G claras se replican generalmente más tarde en la fase S. Cromatina menos condensada. EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico Bandas que marcan todo el cromosoma ADN rico en GC Bandas R La técnica de bandas R supone la desnaturalización de regiones del cromosoma por calor seguida por tinción de Giemsa EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico Bandas que marcan todo el cromosoma Bandas de alta resolución EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico Bandas de alta resolución Nº Bandas 400 550 850 • Bandas de alta resolución Sincronización en prometafase (methotrexate) bandas G EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico Bandas que marcan regiones específicas del cromosoma Bandas C Bandas centroméricas tiñe la heterocromatina EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico Bandas que marcan regiones específicas del cromosoma Bandas t Se tiñen los telómeros EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico Bandas que marcan regiones específicas del cromosoma Bandas NOR Se tiñen los organizadores nucleolares de los cromosomas acrocéntricos EL CARIOTIPO Citogenética molecular Aplicación de las técnicas de biología molecular a preparaciones citogenéticas. Identificación de reestructuraciones producidas “de novo” y de cromosomas marcadores. Detección de anomalías cromosómicas en células en interfase. Estudio de la estructura y función de regiones cromosómicas específicas. EL CARIOTIPO Citogenética molecular Hibridación “In Situ” con fluorescencia (FISH) Una o varias sondas de ADN, unidas a moléculas de marcaje fluorescentes, se hibridan con cromosomas en una preparación, que se visualizan n un microscopio de fluorescencia. Hibridación “In Situ” Fluorescente (FISH) Cromosoma en el portaobjetos desnaturalización ADN doble hélice desnaturalización Marcaje de la sonda con una molécula fluorescente Hibridación de la prueba con el cromosoma desnaturalizado Tipos de sondas de ADN Centroméricas (α-satélite) Sonda α-satélite específica de centrómero •Metafase: Identificación de cromosomas •Interfase: Recuento de cromosomas Tipos de sondas de ADN Sonda específica de locus con sonda control para el cromosoma específica de locus Sonda para identificar la región delecionada Sonda para identificar el cromosoma Tipos de sondas de ADN Teloméricas y subteloméricas (TTAGGG)n Sitio de sondas FISH Altas concentraciones de genes deleciones microscópicas o submicroscópicas pueden tener un impacto significativo. Juegan un papel crítico en el apareamiento de los cromosomas en meiosis Pintado Tipos de sondas de ADN Marcaje del cromosoma entero: pintado Identifica el material de un determinado cromosoma En translocaciones cromosoma 8 Multiplex FISH: Multi-FISH El ADN de cada cromosoma humano se marca directamente con uno o más fluorocromos, de una manera combinatoria, resultando un color único para cada uno de los 24 cromosomas Los 24 tonos de color no pueden ser distinguidos por el ojo humano Se captura un conjunto de imágenes en la escala de grises, uno por cada uno de los cinco filtros distintos Las imágenes son procesadas por el ordenador para dar una imagen pseudocoloreada de la metafase y del cariotipo Cromosoma 1 Cromosoma 2 Cromosoma 3 METAFASE Azofeifa et al. CARIOTIPO Azofeifa et al.
