Download 11-Agentes etiologicos – Dra. Slvia Nates

Mesa redonda:
Agentes etiológicos y diagnóstico
microbiológico de diarreas
Riesgo de infección por rotavirus por
ingestión de aguas superficiales de
uso recreacional en Córdoba,
Argentina.
Estudio de caso: Complejo hídrico
Embalse San Roque-Río Suquia.
3er Congreso Bioquímico de
Córdoba.
3-5 Septiembre, 2015
Dra. Silvia V. Nates
AGENTES ETIOLOGICOS DE DIAREA
Adenovirus
40/41
rotavirus
norovirus
astrovirus
Los rotavirus
son los
agentes
etiológicos
más
frecuentes de
diarrea aguda
en población
infantil en el
mundo
ESTIMACION MUNDIAL DE LA ENFERMEDAD POR ROTAVIRUS
EVENTO
RIESGO
Muertes:
440.000
Internaciones:
2 millones
Consultas ambulatorias:
25 millones
Episodios domiciliarios:
111 millones
Emerging Infect Dis Vol 9, May, 2003
1: 293
1: 65
1: 5
1: 1
Impacto de la enfermedad por rotavirus en la admision
hospitalaria por diarrea.
Hospital Infantil Municipal, Córdoba, Argentina
Rotavirus: Un
tercio de los
casos de diarrea
severa que
requieren
hospitalizacion.
35,0%
Disminución del 85% de los
episodios de diarrea grave por
rotavirus,
Disminución del 86% de las
internaciones por
gastroenteritis por rotavirus.
DIAGNOSTICO POR
LABORATOIO
Prueba de inmunocromatografía:
Sensibilidad del 92% (84-99%, IC 95%)
Especificidad del 91% (78-100%, IC
95%),
Ensayo de inmunocromatografía: una opción para el diagnóstico rápido y certero de rotavirus en
materia fecal.”
Macedo R, Barril P, Giordano M, Nates S. Revista on line COBICO
Mecanismo de Transmisión
Fecal-oral
• Alta carga viral en materia fecal.
• Alta carga viral en aguas servidas
convirtiendo las aguas residuales y toda
matriz acuosa en contacto con aguas
servidas, en fuentes potenciales de
infección por rotavirus
Riesgo de infección por
rotavirus por ingestión de
aguas superficiales de uso
recreacional en Córdoba,
Argentina.
Estudio de caso: Complejo
hídrico Embalse San
Roque-Río Suquia.
Materiales y
Métodos
Sitios de monitoreo y frecuencia
Bajo
Grand
e
Muestreo de Aguas : estacional. Estación húmeda: (Octubre-Marzo;
Estación seca (Marzo-Septiembre) (n=28); 2 muestras por mes.
Año 2010
-
Análisis bacteriológicos
Coliformes totales y fecales.
Técnica: Número más probable (MPN) , de acuerdo a
métodos standard.
Niveles guia: Agencia de Protección del Ambiente (EPA)
de los Estados Unidos de América (USA).
Coliformes totales 5.000 / 5.000
Coliformes termotolerantes 200 / 200
Concentración de virus
• Volume de muestra: 1.5-litros
• Concentración 100 veces
• Método: Centrifugaciones, elusion y
precipitación con PEG.
Detección de genoma viral: Rotavirus.
• Extracción del ácido núcleico y síntesis de
cDNA
• Detección molecular de genoma viral por PCR
con primers específicos.
Detección de enterovirus viable.
La infectividad fue evaluada
por inoculación de las
muestras concentradas en
cultivos celulares de la línea
celular HEp-2 y revelado por
inmunofluorescencia con un
panel de anticuerpos
monoclonales
Resultados
Coliformes totales y
Coliformes termotolerantes
Bajo límite de valor guia
Arriba límite de valor guia
Detección de rotavirus, y enterovirus viable
BAJO
GRANDE
Detección viral
Se detectó:
En todos los puntos de muestreo del río, en las 4
Análisis de resultados
• El Embalse San Roque genera el nacimiento del Río Suquía
con aguas de calidad bacteriológica aceptable pero con
carga de rotavirus y enterovirus viable.
• La detección de enterovirus viable señala la presencia de
virus con potencial infectivo en el agua.
La detección de virus en agua
señala el riesgo potencial de
infección viral en individuos
expuestos a esa matriz acuosa.
EVALUACIÓN
CUANTITATIVA DE
RIESGO
MICOBIOLÖGICO (QMRA)
POR EXPOSICIÓN A
AGUAS
MICOBIOLOGICAMENTE
CONTAMINADAS
EVALUACION CUANTITATIVA DE RIESGO MICROBIOLOGICO (QMRA)
Una estimación matemática de la relación
entre la dosis administrada y la
probabilidad de infección.
Materiales y
Métodos
Cuantificación de genoma de rotavirus (carga
viral).
• Extracción del ácido y síntesis de cDNA
• Cuantificación de la carga viral por qRT-PCR
Análisis dosis-respuesta (probabilidad de
infección en individuos expuestos)
» β-Poisson dose–response model:
Dosis: Volumen de
agua ingerido;
Partículas infectivas.
Eficiencia del método
de concentración y
extracción de ácido
nucleico
PI(d) Es la probabilidad o riesgo de infección en una exposición
individual a la dosis estimada
α = Constante de infectividad del patógeno que caracteriza la relación
dosis-respuesta (rotavirus 0.2531)
N50 = El número de patógenos requeridos para causar una infección en
el 50% de la población expuesta (rotavirus 6.17)
Procesamiento estadístico de
datos: Simulación de Montecarlo
• Probabilidad media de infección por punto
muestreado, con los correspondientes
límites de confianza.
Resultados
Río Suquia: Probabilidad de infección
por ingestión de 10 ml de agua (contacto
secundario)
Que la infección viral se traduzca
en enfermedad depende de:
• Edad
• Estado inmunológico del individuo
infectado.
Utilidad de estimar dosis-respuesta
(probabilidad de infección en individuos expuestos)
• Identificar sitios con mayor riesgo de
exposición. (diferentes sitios de recreación)
• Evaluar políticas de intervención.
Quantification of human infection risk caused by rotavirus in surface waters from
Córdoba, Argentina.
Prez VE1, Gil PI1, Temprana CF2, Cuadrado PR1, Martínez LC1, Giordano MO1,
Masachessi G1, Isa MB1, Ré VE1, Paván JV1, Nates SV1, Barril PA1*
En prensa, Science of the total environment, 2015
Gracias !!!!
Bibligrafía
•
First detection of hepatitis E virus
in Central Argentina:Environmental
and serological survey.
Maribel G. Martínez Wassaf, María B.
Pisano, Patricia A. Barril,Osvaldo C.
Elbarcha, Marcelo A. Pinto, Jaqueline
Mendes de Oliveira,Pablo DiGiusto,
Silvia V. Nates, Viviana E. Ré
J Clin Virol. 2014 Nov;61(3):334-9.
•
•
•
Evidence of Hepatitis A virus
circulation in central Argentina:
Seroprevalence and environmental
surveillance.
Yanez LA, Lucero NS, Barril PA, Díaz
Mdel P, Tenaglia MM, Spinsanti LI,
Nates SV, Isa MB, Ré VE.
J Clin Virol. 61: 334-339. 2014
Quantification of human infection
risk caused by rotavirus in surface
waters from Córdoba, Argentina.
Prez VE1, Gil PI1, Temprana CF2,
Cuadrado PR1, Martínez LC1,
Giordano MO1, Masachessi G1, Isa
MB1, Ré VE1, Paván JV1, Nates SV1,
Barril PA1*
, Science of the total environment, 2015
Elpizarrondelagua.blogspot.com.ar