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Jornadas JIC 2015
Eficacia del método de concentración de rotavirus en aguas y verduras de hojas verdes
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Prez VE, 1Martínez LC, 1Giordano MO, 1Masachessi G, 1Pavan JV, 1Nates SV, 1Barril PA
1- Instituto de Virología Dr J M Vanella - FCM - UNC
Persona que presenta: Prez VE, [email protected]
Área: Epidemiológica / Salud Pública
Resumen:
Las enfermedades infecciosas transmitidas por alimentos son un problema en auge a nivel mundial.
Entre los agentes patógenos que frecuentemente contaminan alimentos se encuentran los virus
entéricos, sin embargo al presente son escasos los estudios dirigidos a la evaluación de
contaminación viral en matrices alimenticias. La principal dificultad para el screening de la calidad
virológica es la falta de métodos sensibles, confiables y estandarizados debido a que los alimentos
presentan cargas virales bajas en comparación con las muestras clínicas. El objetivo del presente
trabajo fue implementar y evaluar la eficacia de métodos de concentración de rotavirus a partir de
vegetales de hojas verdes y matrices acuosas. El ensayo de recuperación se realizó por
quintuplicado en muestras de verduras (lechuga y achicoria) obtenidas del Mercado de Abasto de
Córdoba, y por triplicado en muestras de matriz acuosa de PBS. Los vegetales fueron
descontaminados con hipoclorito de sodio y radiación UV, e inoculados con una suspensión vacunal
de rotavirus (Rotarix®, GSK) de concentración conocida (8.5x104cg/100µL). Paralelamente se
contaminó artificialmente PBS estéril con la misma suspensión de rotavirus vacunal. Como control
del experimento se utilizaron hojas de verduras descontaminadas inoculadas sólo con PBS estéril, y
PBS estéril sin contaminar. A continuación, se realizó la elución de los virus presentes en las
verduras mediante una suspensión de extracto de carne (2,9%) y glicina (6%). Las muestras de PBS
fueron centrifugadas y luego los pellets eluidos con una solución de extracto de carne (3%) y nitrato
de sodio (2M). Finalmente, los virus fueron concentrados (100X) mediante múltiples pasos de
centrifugación, elución y precipitación con polietilenglicol y la cuantificación del genoma de
rotavirus se llevó a cabo mediante PCR cuantitativa con sonda TaqMan®. Los resultados obtenidos
revelaron una eficacia media del método de concentración de rotavirus en muestras de verduras del
20.7% (rango 13.2–29.9%) y del 20.0% (rango 14.4–25.0%) a partir de matrices acuosas. Los
métodos de concentración implementados y evaluados demostraron ser aptos para el estudio de
virus en matrices ambientales, revelando altas eficiencias de recuperación de genoma de rotavirus.
Palabras Clave: virus en alimentos, monitoreo ambiental, rotavirus, verduras
Revista de la Facultad de Ciencias Médicas 2015 Supl.(1): 180-1
Jornadas JIC 2015
Effectiveness of rotavirus concentration method in water and leafy green vegetables
1
Prez VE, 1Martínez LC, 1Giordano MO, 1Masachessi G, 1Pavan JV, 1Nates SV, 1Barril PA
1- Instituto de Virología Dr J M Vanella - FCM - UNC
Persona que presenta: Prez VE, [email protected]
Abstract:
Food-borne infectious diseases are a problem on rise worldwide. Enteric viruses are pathogens that
frequently contaminate foods, however at present there are few studies aimed to assessing viral
contamination in food matrices. The main difficulty for the screening of virological quality is the
lack of sensitive, standardized and reliable methods because food has lower viral loads than clinical
feces samples. The aim of this study was to implement and evaluate the effectiveness of rotavirus
concentration methods from leafy green vegetables and aqueous matrices. The viral recovery test
was performed on 5 samples of vegetables (lettuce and chicory) obtained from the Mercado Central
of Córdoba, and in 3 samples of PBS, used as aqueous matrix. The vegetables were decontaminated
with sodium hypochlorite and UV radiation, and inoculated with a suspension of rotavirus vaccine
(Rotarix®, GSK) of known concentration (8.5x104cg / 100µL). In parallel, sterile PBS was
artificially contaminated with the same suspension of rotavirus vaccine. As controls,
decontaminated vegetables leaves inoculated with only sterile PBS or sterile PBS without
contamination were used. Then, the elution of the viruses present in vegetables was conducted
using a suspension of beef extract (2.9%) and glycine (6%). PBS samples were centrifuged and then
the pellets eluted with a solution of beef extract (3%) and sodium nitrate (2M). Finally, viruses
from both vegetables and aqueous matrices were concentrated (100X) by multistep of
centrifugation, elution and polyethylene glycol precipitation. Rotavirus genome quantification was
performed by quantitative PCR with TaqMan® probe. The average recovery of rotavirus in fresh
vegetables was 20.7% in a range of 13.2 – 29.9%; and 20.7% in a range of 14.4% -25% for aqueous
matrices. The implemented and evaluated virus concentration methods proved to be suitable for the
study of viruses in environmental matrices, revealing high recovery efficiencies of rotavirus
genome.
Keywords: leafy green, food contamination, rotavirus, environmental surveillance
Revista de la Facultad de Ciencias Médicas 2015 Supl.(1): 180-1