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Investigación Aplicada S.A. de C.V.
Soluciones en Nutrición y Salud Animal.
BRONQUITIS INFECCIOSA
AVIAR
Cultivo de órganos
J.Chapa, V.Moreno, E.Rodríguez, R.Ortega.
Laboratorio de Biología
La bronquitis infecciosa (BI) es una enfermedad
viral causada por un miembro de la familia
coronaviridae (VBI), específico del huésped. Las
infecciones primarias en pollos jóvenes
típicamente producen enfermedad respiratoria
altamente contagiosa, pero algunas cepas
pueden causar lesiones en el riñón. Las aves de
postura y reproductoras comúnmente sufren
pérdidas en la producción de huevo, con o sin
evidencia de enfermedad respiratoria.
Enfermedad clínica
Los pollos de todas las edades son susceptibles.
El virus tiene un corto período de incubación (24 –
72 hrs). Los signos clínicos en aves jóvenes se
caracterizan por una infección respiratoria aguda
y por lesiones en la tráquea.
DIAGNÓSTICO
El diagnóstico de BI es complicado debido a que
presenta similitudes con otras enfermedades
aviares. La enfermedad respiratoria y el efecto
sobre la producción y calidad del huevo causadas
por el virus de BI pueden ser confundidos con
otras enfermedades causadas por otros
patógenos. Infecciones mixtas involucrando VBI,
virus de Enfermedad de Newcastle, adenovirus,
Mycoplasma y bacterias coliformes son comunes.
Aislamiento
Los VBI crecen mas comúnmente en embrión de
pollo, cultivo de tráquea (CT) y cultivo celular de
riñón de pollo. Después de 7 días el virus causa
lesiones típicas en el embrión de pollo tales como
enanismo, encorvamiento, y depósitos de uratos
en el mesonefros. Es importante que a los tres
días posteriores a la inoculación se obtenga fluido
alantoideo
que
deberá
estar
libre
de
contaminación
bacteriana
y
dar
una
hemoaglutinación negativa con glóbulos rojos de
pollo.
La ventaja de este método es que cepas de
campo no adaptadas a embrión de pollo producen
una rápida cilostasis en el primer pasaje. Una
limitación es que otros virus también produce
ciliostasis
Inmunohistoquímica
La detección del virus puede realizarse mediante
técnicas de Inmunoperoxidasa con muestras de
tejidos provenientes de pollos infectados, o en la
membrana
corioalantoidea
obtenidos
de
embriones inoculados con material de campo.
Estas pruebas tienen ventajas potenciales y
peden usarse en forma rutinaria para el
diagnóstico
Serología
Las pruebas para evaluar la respuesta específica
del huésped a la infección por VBI son las mas
usadas como métodos de diagnóstico.
El
aumento en los títulos de anticuerpos puede ser
la respuesta a una infección temprana o a la
vacunación. Es necesario analizar muestras de
suero en pares, obtenidas tan pronto sea posible
después de la aparición de los primeros signos y
luego de varias semanas después.
ELISA
La prueba detecta anticuerpos específicos contra
el grupo de BI por lo tanto su uso para identificar
anticuerpos contra serotipos específicos es
limitado, sin embargo es una prueba rápida que
permite analizar muchos sueros en poco tiempo.
Inhibición de la hemoaglutinación
El uso de esta prueba está indicado para detectar
anticuerpos contra diferentes serotipos utilizando
el antígeno que se requiera. Los anticuerpos
producidos por aves jóvenes tienden a ser más
específicos de un serotipo, y las reacciones
cruzadas con antígenos heterólogos son
comunes en reproductoras y gallinas de postura.
Investigación Aplicada S.A. de C.V. 7 Norte 416, Col. Centro. Tehuacan, Pue. CP 75700.
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Microvirus sueroneutralización
Puede ser usada también para detectar
anticuerpos específicos contra cada serotipo, si
se
ocupa
el
antígeno
correspondiente
previamente adaptado al cultivo celular.
los serotipos estándar, con esto se puede
determinar si se trata de un nuevo virus.
1 C(+)
REVERSA TRANSCRIPTASA
(RT-PCR) REACCIÓN DE POLIMERASA EN
CADENA
M
Esta técnica se utiliza para la detección del VBI y
explorar diferencias en las secuencias asociadas
a los serotipos, en la subunidad S-1 del gen de la
glicoproteína.
El análisis del polimorfismo de restricción de largo
fragmento (RFLP) ligado a la prueba de RT-PCR
ha sido desarrollado para diferenciar serotipos,
basado en un patrón único de bandas en la
electroforesis de los fragmentos S-1. Con esta
prueba se pueden identificar los serotipos
conocidos y las cepas variantes, permitiendo
encontrar perfiles para cada serotipo de virus de
BI, de tal manera que las nuevas cepas pueden
ser comparadas con las cepas conocidas en
estudios epidemiológicos. Cepas variantes con
diferentes patrones en relación a las cepas de
referencia han sido identificadas en México, sin
embargo el grado de patogenicidad de estas
cepas es incierto.
PCR BI
M -marcador
C+
-Control
positivo
1- Muestra
Referencias bibliográficas:
1. Cook, J.: Diagnóstico de la Bronquitis Infecciosa. Memorias del
XVI Congreso Latinoamericano de Avicultura. Septiembre de 1999.
Peru.
2. Gelb, J. and Jackwood, M.: Infectious Bronchitis. In: A laboratory
manual for the isolation and identification of avian pathogens. 4th ed.
The American Association of Avian Pathologists. USA. 1998.
Muestras
Para PCR se utilizan aislamientos, fluido
alantoideo de embrión de pollo, órganos: pulmón,
traquea y riñón. Los cuales se mantienen en
refrigeración al igual que el fluido, para las
muestras de aislamientos conservar
en
congelación.
Resultados
En el método de RFLP, la identificación del
serotipo de BI se realiza mediante la comparación
entre el patrón de electroforesis de los fragmentos
de DNA en estudio y el patrón correspondiente de
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