Download S3-MCS10

IDENTIFICACIÓN DE FACTORES LÍTICOS EN LOS SUEROS DE PACIENTES
CON CÁNCER CERVICOUTERINO ESTADIOS II Y III.
Vázquez Zamora Víctor1, González Blanco María2, Gómez Conde Eduardo1,3, Castellanos
Sánchez Víctor1, Erosa Díaz María de Lourdes3, Delgado López Guadalupe1, Díaz-Orea
Ma. De Lourdes3, Díaz y Orea María Alicia1,3.
1
Centro de Investigación Biomédica de Oriente, 2Hospital de Especialidades UMAES, 3Laboratorio
de Inmunología y Biología Celular BUAP.
INTRODUCCIÓN. El sistema inmune es un conjunto coordinado de células y moléculas
con poderosas aptitudes para la eliminación de material extraño, como microorganismos,
macromoléculas, además de células las cuales han sufrido cambios de material genético
como precursoras de tumores. Estos cambios determinan una pérdida en la tolerancia
inmunológica, lo que propicia que se induzcan respuestas inmunológicas contra ellas (1). A
pesar de existir un mecanismo de vigilancia inmunológica que evita el desarrollo de tumores
malignos en el organismo, con cierta frecuencia las células tumorales logran evadir este
mecanismo, estableciéndose en verdaderas masas celulares que pueden focalizar en sitios
distantes al tejido de origen provocando la muerte del paciente. Las células malignas al igual
que otras células del organismo liberan constantemente fragmentos de proteínas de sus
superficies originando anticuerpos que pueden actuar contra las proteínas celulares
inductoras ocasionando la destrucción de la célula (2, 3) o del tejido, afectando al sistema
inmune. Los autoanticuerpos son encontrados en pacientes que sufren de enfermedades
malignas y autoinmunes (4). El papel de los anticuerpos antinucleares en condiciones
especificas de autoinmunidad esta bien definido, pero su papel en el cáncer, aún no es muy
claro (5). La respuesta inmunológica anti tumor puede producir autoanticuerpos contra
varios autoantígenos, incluyendo antígenos propios expresados en células normales o
tumorales (6).
Entre los diferentes tipos de cáncer, el cáncer cervicouterino es una de las principales causa
de muerte entre mujeres en países en desarrollo, se estima que hay alrededor de 500.000
casos diagnosticados por año a nivel mundial y que mueren aproximadamente más de
200,000 mujeres por esta enfermedad. El cáncer cervicouterino (CaCu) persiste como un
problema de salud pública, no controlado a nivel mundial. En México ocupa la segunda
causa de muerte en el género femenino y la primera causa de muerte en mujeres en edad
reproductiva (7).
En este tipo de cáncer no se ha estudiado nada relacionado con la presencia de factores o
posibles anticuerpos que induzcan la lisis de sus células inmunológicamente involucradas.
Por lo anterior, en este trabajo estudiamos la presencia de factores líticos en los sueros de
pacientes con cáncer cervicouterino estadios II y III.
1
OBJETIVO. Identificar el efecto de factores líticos de los sueros de pacientes con CaCu
estadios II y III.
MATERIAL Y MÉTODOS. Se estudiaron 10 mujeres de 20 a 60 años de edad con CaCu
estadios II y III confirmado por biopsia y sin tratamiento, del servicio de radioterapia del
Hospital de Especialidades UMAE y 10 mujeres en los mismos límites de edad
aparentemente sanas, como grupo control. A ambos grupos se le tomó una muestra de
sangre con su consentimiento para determinación de índice de proliferación de linfocitos
por cultivos celulares, factores inductores de lisis por cultivo y por la conversión de una sal
de tetrazolium a formazan, lisis mediada por complemento por la técnica de Momann,
Electroforesis en geles de poliacrilamida-SDS según la técnica de Laemmli,.determinación
de anticuerpos antinucleares (ANA), determinación de IgG de superficie por IFI.
RESULTADOS. De las 10 pacientes con CaCu estudiadas. En el 80% de las pacientes con
CaCu estadios IIIa y IIIb se detectaron factores que inducen lisis de sus células
mononucleares (Gráfica 1), en el 40% de estas pacientes sus índices de proliferación
estuvieron un 50% debajo de lo normal (resultado no mostrado). El 40% de las pacientes
presentaron una proteína atípica que migraba a los ~60 kDa (Fig. 1). El 20% de las
pacientes presentaron ANA positivos a una dilución 1:80 y 1:160 (Fig. 2). Además el suero
de las pacientes presento una proteína de naturaleza a IgG que reconocía la superficie de los
linfocitos, por IFI (Fig. 3).
Índice de Supervivencia
30
25
20
controles
problemas
% 15
10
5
0
0
2
4
6
8
10
12
pacientes
Gráfica 1: Porcentajes de Lisis determinada por reducción del azul de tetrazolio de las
Células mononucleares cultivadas con sueros inactivados de las pacientes.
2
GEL DE POLIACRILAMIDA-SDS
94.7 kD
45.0
21.5
14.4
MPM
c1
c2
c3
c4
c5
p1
p2
p3
p4
Fig 1. Gel de poliacrilamida-SDS. (Corrimiento de sueros de pacientes con CaCu p1-p4 y
sueros control c1-c4.) La flecha nos indica la presencia de una proteína atípica en los sueros
de las pacientes de aproximadamente 60 kDal.
3
DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS ANTINUCLEARES
A
4
B
Fig. 2 Determinación de ANA. A) Suero Control. B) Suero de Paciente con CaCu IIIb.
Inmunofluorescencia indirecta sbre células Hep 2 100x.
INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA
5
Fig. 3. IFI sobre células MN utilizando como primer anticuerpo el suero inactivado de las
pacientes con CaCu y como segundo anticuerpo una IgG de conejo, antiIgG humana.
CONCLUSIÓN. Con los resultados de este trabajo hemos detectado un factor soluble en
los sueros de las pacientes con CaCu estadio III que actúa sobre sus células mononucleares
induciendo su lisis. Este Factor actúa como un ANA y es de naturaleza IgG, que reconoce
las células Hep-2 con un patrón fluorescente homogéneo y a las células mononucleares con
6
un patrón periférico. La mayoría de las pacientes estadio IIIb generalmente recaen lo que se
podría correlacionar con la presencia de este factor. Por tal razón la detección de este factor
soluble es importante como un indicador de malignidad.
Bibliografía.
1- Barrera-Rodríguez R, Peralta-Zaragoza O, Madrid-Marina V. Bases Moleculares de
la Inmunología del Cáncer. Salud Pública de México, 1995; 37(4): 344-353.
2- Schaapherder AF, Wolvekamp MC, te Bulte MT, Bouwman E, Gooszen HG, Daha
MR. Porcine islet cells of Langerhans are destroyed by human complement and not
by antibody-dependent cell-mediated mechanisms. Transplantation. 1996; 62(1):
29-33.
3- Benczur M, Garam T, Szabo J, Pulay T, Petranyi GG. Association between natural
cell mediated cytotoxicity (NCMC) and serum factors in acute leukemia and other
malignant diseases. Onkologie 1981; 4(1): 22-28.
4- Abu-Shakra, Buskila M, Ehrenfeld D, et al. Cancer and autoimmunity. Autoimmune
and rheumatic features in patients with malignancies. Ann Rheum Dis. 2001; 60:
433-41.
5- Imran A, Neelam F, Triq M. Incidence of circulating antinuclear antibodies in
cancer patients. J Med Sci. 2003; 57: 113-16.
6- Houghton AN. Cancer antigens: immune recognition of self and altered self. J Exp
Med. 1994; 180: 1-4.
7- Parkin DM, Pisani P, Ferlay J. Global cancer statistics. CA Cancer J Clin 1999;
49:33-64.
7