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Datos Generales
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA in vitro DE EXTRACTOS DE Oxandra
Nombre del longipetala R. E. Fr. FRENTE A BACTERIAS CAUSANTES DE
ENFERMEDADES NOSOCOMIALES EN MONTERÍA, CÓRDOBA,
Proyecto
COLOMBIA
Semillero
MICROBIOL
Área del
Proyecto
Ciencias Biológicas y del Mar
Subárea del
Microbiología
Proyecto
Tipo de
Proyecto
Proyecto de Investigación
Subtipo de
Proyecto
Investigación en Curso
Grado
VIII
Programa
Académico
biologia
Email
[email protected]
Teléfono
3004509771
Nodo
Córdoba
Integrantes :
[1067951376-LUIS FELIPE HERNANDEZ MOGROVEJO]
Instituciones a las que pertenece :
[891080031-UNIVERSIDAD DE CORDOBA - UNICOR]
Datos Específicos del Proyecto
Introducción
Las infecciones intrahospitalarias son aquellas que se desarrollan durante el ingreso y/o estancia
hospitalaria y en muchas ocasiones están directamente relacionados con los cuidados sanitarios.
Dentro de las principales bacterias causantes de estas infecciones se encuentran Staphylococcus
aureus, Enterococcus sp. y Escherichia coli. Estas bacterias han desarrollado diferentes
mecanismos para contrarrestar el efecto de los fármacos comúnmente empleados para su
control, desarrollando una multirresistencia a diferentes antibióticos. Por esta razón los
científicos a nivel mundial han centrado su interés en la búsqueda de sustancias de origen
vegetal que puedan tener efecto frente a este tipo de patógenos
Planteamiento del Problema
Las infecciones nosocomiales constituyen un problema de salud pública a nivel mundial y tiene
gran repercusión a nivel económico y social (Pérez et al., 2015), además de que aumentan las
tasas de morbilidad y mortalidad, los costos hospitalarios y deterioran la calidad de vida de los
pacientes (Villegas, 2009). América latina es una de las regiones con más altas incidencias de
brotes nosocomiales, producidos por bacterias con resistencia a múltiples antibióticos y
Colombia es uno de los países latinoamericanos que más se ha visto afectado por esta situación,
debido a que las unidades hospitalarias y los pacientes infectados no cuentan con los recursos
suficientes para costear los tratamientos necesarios para contrarrestar estas infecciones (Cabrera
et al., 2007). A raíz de esta multirresistencia de las baterías a los antibióticos y el aumento de las
infecciones nosocomiales es urgente buscar nuevas fuentes de sustancia con actividad
antibacteriana que ayuden a solucionar estos problemas y las plantas son una buena opción para
la obtención de estas sustancias. Hasta la fecha las propiedades antibacteriales de Oxandra
longipetala han sido poco estudiadas y no existe ningún trabajo de esta planta frente a bacterias
nosocomiales, razones por las que en aras de obtener alternativas para el tratamiento de las
infecciones nosocomiales mediante el aprovechamiento de nuestros recursos florísticos y el
aporte de información científica con relación a este tema, ya que es escasa, en este trabajo se
evaluará la actividad antibacteriana in vitro de extractos de Oxandra longipetala R. E. Fr. frente
a bacterias causantes de enfermedades nosocomiales en Montería, Córdoba, Colombia.
Objetivo General
? Evaluar la actividad antibacteriana in vitro de extractos de Oxandra longipetala R. E. Fr. frente
a bacterias causantes de enfermedades nosocomiales en Montería, Córdoba, Colombia
Objetivo Específicos
? Determinar la actividad antibacteriana in vitro de extractos de Oxandra longipetala R. E. Fr.
frente a bacterias causantes de enfermedades nosocomiales mediante el método de
microdilución. ? Establecer la actividad antibacteriana in vitro de extractos de Oxandra
longipetala R. E. Fr. frente a bacterias causantes de enfermedades nosocomiales mediante el
método de dilución en agar empleando pozos.
Referente Teórico
Enfermedades nosocomiales: en la actualidad ha habido un incremento de estas enfermedades y
Staphylococcus aureus, Enterococcus sp. y Escherichia coli están dentro del grupo de las
bacterias que más frecuentemente ocasionan estas infecciones debido a que han desarrollado
una serie de mecanismo que inhiben la acción de los antibióticos adquiriendo así una
multirresistencia a estos. Resistencia bacteriana: la resistencia bacteriana se define como una
?condición? microbiológica caracterizada por la capacidad natural o adquirido, por parte de una
cepa bacteriana de permanecer refractaria a los efectos bactericidas o bacteriostáticos de un
antibiótico (Salazar et al., 2010). Una vez que se introduce un antibiótico en el mercado, la
aparición de cepas con resistencia es cuestión de tiempo, se ha demostrado que el mecanismo
que más se prescribe en un momento dado, es al que las bacterias desarrollan la resistencia
(Herrera, 2014). Efecto de los extractos naturales frente a las bacterias: los mecanismos de
acción de los antimicrobianos naturales no están totalmente conocidos. Sin embargo, se cree
que su efecto antimicrobiano se debe a diversos factores entre los que podemos mencionar: la
ruptura de la membrana por terpenoides y fenoles, el efecto sobre el material genético causado
por cumarinas y alcaloides entre otros. El efecto de estos, probablemente se ve favorecido por la
absorción de polifenoles a través de la membrana bacteriana, inducida por una ruptura de la
misma y la subsecuente liberación del contenido celular y la generación de hidroperóxidos de
polifenoles (Méndez, 2013). El blanco exacto de los antimicrobianos naturales con frecuencia
no se conoce o no está bien definido, debido a la dificultad para identificar el sitio de acción
específico, ya que muchas reacciones pueden ocurrir de manera simultánea en un mismo lugar
(Negi, 2012). Se ha observado que tras la ruptura de la membrana el contenido celular queda
expuesto, interfiriendo con el transporte activo, el metabolismo enzimático y la disipación de la
energía celular en forma de ATP. La degradación de la pared celular, el daño de la membrana
citoplasmática y las membranas proteicas, la liberación del contenido celular y la coagulación
del citoplasma, entre otros factores pueden causar la muerte de la célula (Méndez, 2013). La
especie vegetal Oxandra Longipetala R. E. Fr. pertenece a la familia Annonaceae, conocida en
el departamento de Córdoba con el nombre de ?Yayá Morena? y en la Amazonia su corteza es
usada para amarrar cargas, de donde deriva el nombre de ?carguero?, y frecuentemente su
madera es usada en la construcción de viviendas (Murillo, 2001).
Metodología
Área de estudio: este trabajo se realizará en el laboratorio de Química de productos naturales, en
el área de bioensayos. Extractos vegetales: los extractos vegetales (Etanólico, Metanólico, Diclorometano y Acuoso) de Oxandra longipetala R. E. Fr. serán proporcionados por el grupo de
investigación Química de Productos Naturales de la Universidad de Córdoba. Microorganismos:
los aislados clínicos de Staphylococcus aureus, Enterococcus sp. y Escherichia coli serán
suministrados por un laboratorio clínico de microbiología de la ciudad de Montería. Evaluación
de la actividad antibacteriana: se evaluará por los siguientes métodos: Método de
Microdilución: para este método se emplearán microplacas ELISA de 96 pozos a las cuales se
adicionarán 50 µl del extracto a las diferentes concentraciones que van de 1.25 ppm hasta 100
ppm y 50 µl del inóculo bacteriano previamente estandarizado según el protocolo descrito por
Valgas et. al. (2007). De igual forma se procederá con los controles, para el control positivo se
utilizaran pozos que contendrán el antibiótico (Vancomicina para el caso de Staphylococcus
aureus y Enterococcus sp. y Ciprofloxacina para Escherichia coli) con el inóculo bacteriano y
para el control negativo pozos con el inóculo bacteriano en DMSO al 10%, sin el extracto a
evaluar. Posteriormente las microplacas serán selladas e incubadas a 37 °C durante 18-24 horas.
Finalmente al haber transcurrido el periodo de incubación, el crecimiento bacteriano se evaluará
midiendo la absorbancia utilizando un lector ELISA (ChroMate® 4300) y luego se adicionarán
20 µl de bromuro de 3-(4,5-dimetil-2-tiazolil)-2,5-difeniltetrazolium (MTT), para determinar la
viabilidad de las células. Método de difusión en agar empleando pozos: se preparará una mezcla
de agar Mueller Hinton y el inóculo previamente estandarizado aun cuando el agar no se haya
solidificado, adicionando 25 ml del agar y 100 µl del inóculo por cada caja de Petri, una vez se
gelidifíca el agar se hacen 5 pozos de 6mm aproximadamente utilizando un sacabocados estéril
en los cuales se adicionaran 100 µl en cada pozo del extracto en diferentes concentraciones que
van de 1.25 ppm hasta 100 ppm, de igual forma se utilizarán pozos con los diferentes
antibióticos (Vancomicina para el caso de Staphylococcus aureus y Enterococcus sp. y
Ciprofloxacina para Escherichia coli) y DMSO al 10% como controles positivos y negativos
respectivamente. Las cajas serán selladas e incubadas a 37°C durante 24 horas. Análisis
estadísticos: los datos obtenidos serán tabulados en Microsoft Excel, se realizará un análisis de
varianza, comparación de medias, supuestos de independencia, normalidad y homogeneidad de
varianza, a través de un diseño completamente al azar de estructura factorial con la ayuda del
paquete estadístico R versión 3.1.
Resultados
Se espera que Oxandra longipetala R. E. Fr. presente actividad antibacteriana frente a los
aislamientos clínicos de Staphylococcus aureus, Enterococcus sp. y Escherichia coli.
Conclusiones
Bibliografía
- Herrera, N. 2014. ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DEL EXTRACTO METANOLICO Y
SUBEXTRACTOS BENCINICO Y ACUOSO DEL DÓLAR DE MAR Melita
quinquiesperforata, FRENTE A BACTERIAS DE INTERÉS CLINICO. Trabajo de grado,
inédito. Departamento de Biología. Universidad de Córdoba. - Méndez, N. 2013. ACTIVIDAD
ANTIMICROBIANA IN VITRO DE EXTRACTOS VEGETALES FRENTE A BACTERIAS
NOSOCOMIALES OBTENIDAS EN EL HOSPITAL SAN JERÓNIMO DE MONTERÍA,
CÓRDOBA, COLOMBIA. Trabajo de grado, inédito. Departamento de biología. Universidad
de Córdoba. - Pérez, D.; Lacerda, A.; Montero, L.; Cerdeira, M.; Rodríguez, Y. & Borrero, R.
2015. INFECCIONES RELACIONADAS CON LA ATENCIÓN SANITARA EN UNIDAD
DE TERAPIA INTENSIVA PEDIATRICA. Rev MEDICIEGO; VOL.21 No1. - Santana, M.
2013. DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DEL EXTRACTO
DETANOLICO Y SUBEXTRACTOS DE Laetipuros persicinus FRENTE A BACTERIAS
AISLADAS EN EL HOSPITAL SAN JERÓNIMO DE MONTERÍA (CÓRDOBACOLOMBIA). Trabajo de grado, inédito. Departamento de Biología. Universidad de Córdoba. Villegas, J. 2009. ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DEL EXTRACTO METANOLICO DE
LAS ESPONJAS MARINAS Amorphinopsis atlantico Y Lissodendoryx carolinensis FRENTE
A BACTERIAS AISLADAS EN EL HOSPITAL SAN JERONIMO DE MONTERÍA
(CÓRDOBA-COLOMBIA). Trabajo de grado, inédito. Departamento de biología. Universidad
de Córdoba.