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EXPERIMENTO
No. 3
OBTENCION DE EMULSINA
OBJETIVOS
a) Obtener una enzima, la emulsina, a partir de almendras dulces.
b) Comparar la actividad de la emulsina obtenida, bajo dos diferentes
temperaturas por acción sobre el p-nitro fenil - -D- glucósido.
ANTECEDENTES
1. ¿Qué son los péptidos y las proteínas y de que están compuestos
2. Cuantos tipos de estructuras proteícas se conocen y mencione algunas
de sus funciones.
3. Qué son las enzimas y que factores las desnaturalizan?
4. ¿De que productos naturales se puede aislar la emulsina y para que se
usa?
5. ¿Qué son y como se forman las uniones glucosídicas  y ? Busque
ejemplos y mecanismos de hidrólisis ácida.
MATERIAL
Erlenmeyer de 125 ml
Vidrio de reloj
Embudo de vidrio
Erlenmeyer de 250 ml
Pinzas de 3 dedos c/ nuez
Agitador magnético
Espátula
Agitador de vidrio
Probeta de 25 ml
Recipiente de peltre
Frasco vial
Barra magnética
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
REACTIVOS
Almendras desengrasadas
Ácido Acético al 1 %
10 g
40 mL
Acetona
p-nitro fenil-D-glucosido
50 mL
1 mg
PROCEDIMIENTO
Extracción de la emulsina
Se pesan 10 g de polvo de almendras desengrasadas (Nota 1), se
colocan en un matraz Erlenmeyer de 125 mL y se agregan 40 ml de ácido
acético al 1 %; someta la mezcla a una agitación constante durante 20
minutos, cuidando de sujetar el matraz con una pinza, para evitar que el
movimiento lo desplace.
Se suspende la agitación y se filtra por gravedad, la solución filtrada
se enfria en baño de hielo, y se le añade poco a poco 25 mL de acetona.
Mantenga la solución en el baño de hielo durante 10 minutos (Nota 2),
filtre por gravedad.
Comprobación de la actividad enzimática
Tome un poco de la emulsina que se encuentra en el papel filtro y
colóquela en un vidrio de reloj y deje secar. Ya seca, pese 1 mg y colóquela
en un frasco vial, agregue 2 ml de agua destilada, agite y agregue 1 mg del
p-nitro fenil--D-glucósido, agite y observe los cambios y el tiempo en que
se producen.
Compare los resultados obtenidos con las dos muestras de emulsina y
haga sus propias conclusiones.
La emulsina se puede recuperar del papel filtro y guardar, ya seca, en
el refrigerador.
Es recomendable hacer una determinación cuantitativa
del p-nitro fenol formado en la reacción con emulsina.
NOTAS
Nota 1: Use, según el caso, las almendras desengrasadas a temperatura
ambiente o las almendras desengrasadas a temperatura de reflujo, que
preparo de la practica anterior.
Nota 2: Observe que la emulsina precipita como un sólido blanco.
CUESTIONARIO
1. ¿Con qué otros nombres se conoce a la emulsina?
2. ¿Por su modo de acción, ¿cómo se clasifica esta enzima?
3. Escriba la reacción que se produce entre la enzima y el glucósido.
4. La comparación de la actividad enzimática de la emulsina extraída de
las dos muestras de almendras dulces tratadas, a que conclusiones le lleva.
5. ¿Qué otro glucosido natural podría emplear para comprobar la actividad
de la enzima?
6. ¿Qué usos podría darle al residuo de las almendras?
6. Proponga un método para hacer la determinación cuantitativa del p-nitro
fenol formado durante la reacción con emulsina.
BIBLIOGRAFÍA
Giral .J. y Rojahn,
“Productos Químicos y Farmaceuticos”,
Méx. (1966).
Quintero Angelina. Facultad de Química.
Tesis.
México D.F. (1963)
Methods in enzimology
Vol.VIII, pág. 42
Baker, Pardoe, Hapton,
“Nature”, 197, 231 (1963)