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PRÁCTICA 3
DETERMINACIÓN DE VIABILIDAD EN SEMILLAS
La viabilidad de una semilla se define como el período durante el cual es
capaz de germinar bajo condiciones adecuadas.
En semillas sometidas a un proceso de imbibición, el sistema
mitocondrial se vuelve funcional, estableciéndose un cierto grado de
respiración basal que permite la oxidación de los bajos contenidos de
monosacáridos que el embrión haya podido tomar del endospermo o los
cotiledones. Esta respiración implica, lógicamente, el establecimiento de un
flujo de electrones en las cadenas de transporte mitocondriales.
La sal tetrazólica tiene un potencial de óxido-reducción intermedio entre
los transportadores de la cadena mitocondrial y, por tanto, es capaz de captar
electrones. Este compuesto en estado oxidado es soluble e incoloro, pero al
reducirse (tomando los electrones del flujo respiratorio) se convierte en
formazan, insoluble y de color rosado.
Este compuesto se depositará sobre el tejido que haya llevado a cabo su
reducción, preferentemente sobre las células embrionarias, con lo cual, al cabo
de un tiempo, que dependerá del tipo de semilla, el embrión aparecerá de color
rosado.
OBJETIVO
Determinar la viabilidad de embriones aislados de distintas especies
usando el test del cloruro de tetrazolium.
MATERIALES
Semillas de varias especies: Corylus avellana (avellana), Juglans regia (nogal),
Vicia faba (haba), Eucalyptus globulus (eucalipto).
Solución de cloruro de tetrazolium al 1%: se disuelve 1 g de 2,3,5-trifenilamina
en 100 mL de agua destilada. Se ajusta el pH=7, y se almacena en
frasco opaco.
Viales.
Bisturí y pinzas.
PROCEDIMIENTO
Las semillas desprovistas del pericarpo se imbiben en agua corriente.
Tras 24 h, se pelan y se aísla el eje embrionario procurando que no se dañe. A
continuación se sumergen en la solución de tetrazolium y se mantienen en
oscuridad y a 36º C durante 30 minutos. Al cabo de este tiempo se observa la
coloración que adquieren los embriones, previo corte longitudinal con bisturí de
los cotiledones.