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Caracterización del receptor P2X5 de ratón y cobayo.
Ramos-Lomas T., Liñán-Rico A., Espinosa-Luna R., Barajas-López C.
IPICYT, Camino a la Presa San José 2055. Col. Lomas 4 sección CP. 78216.
San Luis Potosí S.L.P. Tel:(444) 834 2000
Los receptores P2X son activados por ATP extracelular y están involucrados en el
funcionamiento intestinal mediando potenciales postsinápticos excitatorios rápidos en
neuronas mientéricas. Se han identificado hasta la fecha siete subunidades (P2X 1-7) que se
ensamblan como trímeros y forman receptores ionotrópicos funcionales; estos pueden ser
homoméricos o heteroméricos con propiedades farmacológicas y biofísicas específicas.
Entre las características del P2X5 se encuentran que no es activado por αβmeATP, es
potenciado por zinc e inhibido por concentraciones altas de Ca2+.
La subunidad P2X5, ha sido localizada en intestino de ratón por immunoreactividad
tanto en el plexo mientérico como en el submucoso. Forma canales heteroméricos con P2X1
y se ha propuesto que está formando receptores heteroméricos con P2X2. Se desconoce si
existen isoformas funcionales de la subunidad P2X5 en plexo mientérico de ratón, y en el
caso de cobayo no se ha clonado la subunidad P2X5. Sin embargo, nosotros creemos que
para ambos pueden existir isoformas capaces de formar canales heteroméricos y
homoméricos. Por lo que nos planteamos el objetivo de aislar las variantes del P2X5 que se
expresan en neuronas mientéricas de cobayo y ratón y caracterizarlas farmacológica y
funcionalmente.
Utilizamos la técnica de RT-PCR para aislar las variantes de splicing de ambas
especies y la de PCR de célula única para determinar si los transcritos aislados provienen de
neuronas mientéricas y cuántas de estas lo expresan.
En ratón identificamos 2 variantes de splicing (P2X5imm-1 y P2X5imm-2) la segunda
corresponde al P2X5 reportado y la primera a una variante de splicing alternativo, que retiene
el intrón 6-7 de 267 pb. En cobayo, aislamos 2 variantes también (P2X5icy-2 y P2X5icy-7),
ninguna de las cuales ha sido reportada, la segunda creemos que corresponde a la variante
completa (tiene los 13 exones que se reportan para la secuencia de ratón) y la primera es
una variante de splicing alternativo que pierde el exon 2 de 151 pb.
Encontramos que el 20% de las neuronas mientéricas de ratón presentan el transcrito
del P2X5, comparado con el 78% de neuronas mientéricas de cobayo.
Actualmente estamos realizando la caracterización farmacológica en ovocitos de
Xenopus Laevis del receptor homérico P2X5. Como perspectiva a futuro, queremos también
realizar la caracterización de los receptores heteroméricos que forme el P2X5 con otras
subunidades aisladas en nuestro laboratorio.