Download fitoproteasas de látex de asclepias curassavica l

FITOPROTEASAS DE LATEX DE ASCLEPIAS CURASSAVICA L.
(ASCLEPIADACEAE)
Liggieri, C.S.1, Arribére, M.C.1 *, Cortadi, A.A.2, Gattuso, M.2, Priolo, N.S1.
1LIPROVE, Dto. Cs. Biológicas, Fac. de Cs. Exactas, U.N.L.P., CC 711
B1900AVW La Plata; Argentina. 2Botánica, Dto. Cs. Biológicas, Fac. de
Cs. Bioquímicas y Farmacéuticas, U.N.R., Suipacha 531 (2000). Rosario.
Argentina. E-mail: [email protected]
La familia Asclepiadaceae se caracteriza por desarrollar
laticíferos. La presencia de proteasas contenidas en el látex de algunas
especies, Araujia, Asclepias, Calotropis y Morrenia han sido estudiadas.
El objetivo del presente trabajo es determinar el origen y desarrollo de
laticíferos y estudiar las proteasas presentes en el látex de Asclepias
curassavica L. El sistema de laticíferos se origina a partir de un número
definido de células iniciales que están diferenciadas ya en el embrión
dispuestas formando un anillo irregular en el nudo cotiledonear, y no
adiciona nuevas iniciales durante el posterior crecimiento de la planta.
Durante su crecimiento el extremo se ramifica repetidas veces
desarrollándose en todas las direcciones sin anastomosarse exhibiendo un
crecimiento intrusivo. Repetidas divisiones nucleares no seguidas de
citocinesis forman un protoplasto multinucleado.
El látex de tallos de Asclepias curassavica fue recogido sobre
buffer fosfatos 0.1 M (pH 7) con EDTA 5mM y centrifugado a 16.000 x
g durante una hora a 4C obteniendose un "extracto crudo". El mismo
mostró máxima actividad caseinolítica en un rango de pH 7,5-8,5.
Mediante isoelectroenfoque y su correspondiente zimograma se demostró
que las fracciones proteolíticamente activas tienen valores de pI
superiores a 9,3. La purificación de las proteasas presentes en el látex se
llevó a cabo por cromatografía de intercambio catiónico .(CM Sepharose
CL-6B Fast Flow,FPLC) y el análisis de las masas moleculares por SDSPAGE
*Profesional de apoyo CICBA