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SECCIÓN 2
1-Una Plataforma Transiente para la Evaluación Rápida de Resistencia a Virus por RNAi
Debat, Humberto; López Lambertini,Paola; Ducasse, Daniel.
Instituto de Patología Vegetal, Centro de Investigaciones Agropecuarias (IPAVE – CIAP),
Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Camino 60 cds s/n km 5 y ½, 5119.
Córdoba, Argentina.
[email protected]
La resistencia a virus por RNAi se basa en la transformación genética estable de plantas,
con construcciones que tengan la capacidad de inducir la vía de silenciamiento génico
mediada por RNA cuyo blanco sean genes virales.
La eficiencia de estas construcciones en su capacidad de silenciar genes blanco y conferir
resistencia es altamente variable, y depende en la selección del gen viral blanco, su
naturaleza, función y conservación, la longitud de la construcción, el promotor utilizado
entre otros factores. Por otro lado, la incorporación de estas construcciones al genoma de
planta es generalmente un trabajo arduo y prolongado que, una vez finalizado permite
iniciar la evaluación de la eventual resistencia.
En este trabajo se presenta una estrategia basada en la expresión transiente de la
construcción génica a analizar en Nicotiana benthamiana seguida de inoculación viral y
evaluación de resistencia en un lapso de 17 días.
Se identificó una región conservada del gen “N” de tres tospovirus causales de la peste
negra del tomate en Argentina: Tomato spotted wilt virus, Groundnut ringspot virus y
Tomato chlorotic spot virus. Dicha región fue clonada en sentido directo y antisentido a
ambos flancos de un intrón y bajo el promotor CaMV-35S en un vector binario de
transformación de A. tumefaciens.
Plantas completas en estadio de 3-5 hojas fueron sumergidas en cultivos saturados de A.
tumefaciens diluidos 1/10 en medio de infiltración en cámara de vacío a 0.8bars por 2
minutos. Dos días post-infiltración fueron inoculadas mecánicamente con los virus
mencionado y se evaluó infección viral sistémica 15dpi por presencia o ausencia de
síntomas, DAS-ELISA y qReal-Time PCR, observándose una fuerte respuesta de
resistencia, de alta frecuencia.
Se presenta esta plataforma como una alternativa de prueba rápida, simple y eficiente
para la evaluación de resistencia a virus en plantas.