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XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico SILENCIAMIENTO INDUCIDO POR VIRUS DEL GEN CAPSANTHINACAPSORRUBINA SINTASA (CCS) DE LA RUTA DE BIOSÍNTESIS DE CAROTENOIDES EN PLANTAS DE CHILE (CAPSICUM spp.) Angel Fuentes Eduardo Martínez1, Alejandra Aguilar Barragán2 y Neftalí Ochoa Alejo2,3,4 1 Instituto Tecnológico de Jiquilpan 2 Centro de Investigación y de Estudios Avanzados del IPN-Unidad Irapuato, Guanajuato. Km 9,6 Libramiento Norte Carretera Irapuato-León, C.P. 36821, Tel (462) 6239654. 3Departamento de Ingeniería Genética de Plantas, y 3Departamento de Biotecnología y Bioquímica. 4 Corresponding author E-mail: [email protected] PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA México es uno de los mayores productores de Capsicum annuum, la especie más cultivada de chile en el mundo. Han sido pocos los estudios en nuestro país sobre en biología molecular respecto al metabolismo secundario de compuestos de interés comercial, acumulados en los frutos de chile. Los carotenoides son compuestos isoprenoides lipofílicos de amplio uso industrial. Debido a que se conoce poco en los aspectos moleculares del metabolismo secundario de estos compuestos, en este trabajo se planteó como objetivo la construcción de un vector de silenciamientode los genes involucrados en la biosíntesis de carotenoides con el fin de tener la capacidad de manipular y controlar dicha ruta metabólica para la producción específica de ciertos carotenoides. En este trabajo se estudió el gen CCS, último de la ruta de biosíntesis. METODOLOGIA Construímos un vector viral usando los vectores TRV2 y TOPO8, para amplificar una secuencia parcialdel gen de interés mediante la técnica de PCR, lo purificamos, lo ligamos a TOPO8que contiene el gen de resistencia aespectinomicina, lo introdujimos aEscherichia coliy la crecimos.Se extrajo su plásmidopara hacer una reacción de restricción con la enzima XBA I, se linearizó el TOPO8 y se eliminaron sales contaminantes para recombinarlo con elvectorde silenciamiento derivado delTobacco rattle virus(TRV) modificado para tener un gen de resistencia a kanamicina para hacer selección.Se extrajo el plásmido de las nuevas colonias obtenidas para introducírselo a las bacterias de Agrobacteriumtumefaciensque son resistentes a rifampicina y carbenicilina. Para comprobar que la construcción fuera la correcta se realizó un PCR de colonia y se corrieron las muestras en un gel de agarosa para observar que el gen CCS estuviera presente. CONCLUSIONES Se comprobó que la construcción de nuestro vector viral TRV2-CCS fue satisfactoria y funcional debido a que en la lectura de un gel de agarosa con muestras de PCR de colonia de agrobacteirum con el plásmido incluido mostró la banda de bases esperada © Programa Interinstitucional para el Fortalecimiento de la Investigación y el Posgrado del Pacífico Agosto 2014
