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REPASO 2º PARCIAL 2014
1) Una molécula de ADN de cadena doble, cuya secuencia se indica a continuación, produce in vivo un polipétido de 6
aminoácidos:
TAC ATG ATC ATT TCA CGG AAT TTC TAG CAT GTA
ATG TAC TAG TAA AGT GCC TTA AAG ATC GTA CAT
a- ¿Cuál de las cadenas se transcribe y en qué dirección?
b- Marque el extremo 5`y 3`de cada cadena.
c- Si se produce una inversión entre el segundo y el tercer triplete de los extremos izquierdo y derecho, respectivamente,
y se transcribe la misma cadena de ADN, ¿cuál será la longitud del polipéptido resultante?
d- Considere de nuevo la molécula original y que la transcripción ocurre sobre la cadena de abajo, de izquierda a
derecha. Indique la secuencia de bases del transcripto y marque los extremos 5`y 3`del anticodón que inserta el cuarto
aminoácido en la cadena en crecimiento. ¿Cuál es este aminoácido?
2- Suponga que Ud. tiene un péptido Arg-Lys-Pro-Met y además Ud. sabe que las moléculas de ARNt usadas en su
síntesis tienen los siguientes anticodones:
3`-GGU-5`
3`-GCU-5`
3`-UUU-5`
3`-UAC-5`
Determine la secuencia de nucleótidos de ADN para la cadena molde. Indique también sus extremos.
3) Durante el TP de Operón Lac, luego de centrifugar los cultivos de E. coli y descartar el sobrenadante se agregó 10 l
de tolueno y 5 l de MgCl2. Se agitó y posteriormente se agregó el ONPG, se dejó incubar a Tº óptima para después
determinar su D.O.
a- Explicar qué función tiene el tolueno y el cloruro de magnesio.
b- Teniendo en cuenta que la ecuación de la recta para la curva patrón, donde la D.O. está en función de la
concentración de ONP (expresada en M es y = 4,86 x + 0,012)
Calcular la U.E. para cada uno de los ensayos:
 Tubo 1 (con lactosa): 1,003 D.O. y 5 min de incubación
 Tubo 2 (con glucosa): 0,045 D.O. y 10 min de incubación
Obs. Definición de UE: se define como la cantidad de enzima necesaria para producir 1 mmol de ONP producidos por
min. a partir de ONPG, en condiciones de pH y Tº óptimas
c- Proporcione todos los genotipos posibles de operón lac que produce -galactosidasa y permeasa en las
siguientes condiciones. No de genotipos diploides parciales.
Cepas
A
B
C
D
E
Lactosa ausente
permeasa
-gal
+
+
+
-
Lactosa presente
permeasa
-gal
+
+
+
+
+
+
-
4- El mapa del operón lac es: I P O Z Y A. Dados los genotipos de los siguientes diploides parciales,
completar la siguiente tabla con "+" si espera actividad de la proteína codificada por "Z" y de la codificada
por "Y" o con "-" si no espera actividad. Considere que las mutaciones indicadas por "-" impiden:
* que las correspondientes regiones no codificantes del operón se unan al ligando específico (represor).
* que las correspondientes regiones codificantes del operón puedan originar por traducción una proteína
biológicamente activa.
Observación
Is: gen del represor con una mutación que origina una proteína incapaz de unirse al inductor (pero su
capacidad de unirse al operador está intacta). (20)
5- Ud. quiere inducir resistencia en una cepa de E. coli, sensible a la rifampicina. (20)
a- ¿A qué nivel actúa la rifampicina? Explicar.
b- Si emplea un mutágeno químico, como Naranja de Acridina (NA), ¿cómo actúa este mutágeno? ¿qué tipo de
mutaciones genera?
c- Durante el TP se preparó una solución madre de 2 mg/ml de NA para luego realizar las diluciones
correspondientes (100 g/ml, 50 g/l, etc). Sabiendo que el 1º tubo eppendorf contenía 1,5 ml de caldo nutritivo y
los restantes 0,75 ml, indicar que volumen de solución madre de NA se debería tomar para lograr una
concentración final de 100 g/ml. Indicar también cómo obtendría las restantes concentraciones.
6- El plásmido pSCI de E. coli pSCI transporta genes para la resistencia a los antibióticos tetraciclina (tet) y kanamicina.
El gen tet tiene un solo sitio de restricción para la enzima Hind III. Suponga que tanto el plásmido como el gen para
la proteína gluteína de maíz son clivados por esta enzima e incubados para crear ADN recombinante. Luego se incuba
la mezcla de reacción con E. coli sensible a ambos antibióticos. ¿Cuáles serían las características, con respecto a la
sensibilidad o la resistencia a los antibióticos, de las colonias de E. coli que contienen, además de su propio genoma:
d- a- Nada de ADN nuevo;
e- b- ADN de psCI nativo;
f- c- ADN de pSCI recombinante
g- d- ADN solo de maíz;
h- e- ¿Cómo detectaría estas colonias?
7- Un ADN viral circular cerrado se trata con una endonucleasa de restricción que genera extremos cohesivos o
pegajosos. Este ADN tiene un solo sitio de restricción, que posee la siguiente secuencia:
5`- GGTATGCTAGCATG-3`
3`- CCATACGATCGTAC-5`
a- Indicar la región más problable del centro del sitio de restricción. Justificar la respuesta.
b- Después que la enzima de restricción ha escindido ambas hebras, la muestra se calienta para inactivar la enzima y
después se enfría lentamente. Al observar el resultado por microscopia electrónica, se aprecia una molécula de ADN
circular. ¿Cómo puede explicarse este resultado?
c- Cuándo la solución final anterior se lleva a pH alcalino con NaOH, se observa al microscopio que sólo contiene
moléculas de ADN lineal monofilar (una sola hebra). ¿Cómo puede justificarse este nuevo resultado?