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XVIII Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico
Nuevo Vallarta, Nayarit Agosto 2014
CARACTERIZACION FUNCIONAL DEL GEN OCH3 DE Sporothrix schenckii
INVOLUCRADO EN LA RUTA DE GLICOSILACIÓN DE PROTEÍNAS
Karla
Alejandra
Carmona
Baca.
Instituto
Tecnológico
de
Morelia,
[email protected]. Asesor Dr. Héctor Manuel Mora Montes. Departamento de
Biología, DCNyE. Universidad de Guanajuato, [email protected]
Planteamiento del problema
Sporothrix schenckii es un hongo patógeno de humanos, y es el agente causal de
la esporotricosis, una micosis distribuida en todo el mundo, generalmente en
pacientes inmunocomprometidos. En hongos se requiere la glicosilación de
proteínas para la composición normal de la pared celular y la virulencia. La
estructura y organización de la pared celular de S. schenckii ha sido poco
estudiada y hasta ahora los componentes mejor caracterizados son los péptidoramnomananas, los cuales son modificados con N- y O-glicanos ricos en manosa
y ramnosa que son una buena fuente de antígenos de hongos. Actualmente, poco
se sabe de las rutas de glicosilación de proteínas en este organismo y mucho
menos de la función de los genes de la familia OCH1, los cuales podrían participar
en la ruta de la N-glicosilación de proteínas. Mediante el aislamiento del marco de
lectura abierto del gen OCH3, y su expresión heteróloga en una mutante och1Δ de
Saccharomyces Cerevisiae se espera dilucidar la función del gen OCH3 dentro de
las rutas de elaboración de glicoproteínas.
Metodología
Una vez transformada la mutante nula en Saccharomyces Cerevisiae se puede
caracterizar el gen OCH3; por lo cual iniciamos con inocular la cepa de SC del gen
OCH3 en medio YNB para poder extraer el RNA, después se cuantifico las células
presentes en cámara de Neubauer, y posteriormente se hizo una síntesis de
cDNA, esto para comprobar si efectivamente se está expresando el gen, para
finalizar se hizo un ensayo de sensibilidad con agentes perturbadores de la pared
celular, donde se cultivó con calcofluor, la higromicina, y el rojo congo.
Conclusiones
Una vez transformada la mutante nula S. Cerevisiae se pudo caracterizar el gen
OCH3, debido a que al haberle interrumpido el gen OCH1 se observó que era
hipersensible a un rango de agentes perturbadores de la pared celular y a su vez
se atenuó su virulencia. Por lo tanto, al tener esta mutante nula complementada
por el gen OCH3 de S. schenckii se podrá determinar si este es un ortólogo
funcional del gen de Saccharomyces Cerevisiae.