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TP N°2. Biomoléculas Orgánicas.
Alumnos: Juan Reinero, Tomas Petitti, David Cura
Experimento para poner en evidencia la actividad de una enzima.
Se quiere poner en evidencia la actividad de una enzima presente en la saliva (amilasa) y como los
factores ambientales (pH y temperatura) afectan su actividad (hidrolizar los polisacáridos de
almidón convirtiéndolos en monosacáridos.
Se llevan a cabo 4 ensayos:
Control Negativo: Almidón sin saliva + Reactivo Benedict. El almidón es un polisacárido sin
capacidad de reducir al reactivo Benedict y por lo tanto no se producirá cambio de coloración
o precipitado.
40 gotas de almidón + 40 gotas de reactivo Benedict. Mezclar. Calentar. Dejar enfriar a
Temperatura Ambiente.
Control Positivo: Glucosa + Reactivo Benedict. La glucosa es un monosacárido con gran
capacidad de reducir al reactivo Benedict, y esto se evidencia en un cambio de coloración y
precipitado.
40 gotas de glucosa + 40 gotas de reactivo Benedict. Mezclar. Calentar. Dejar enfriar a T.A
Presenciar la actividad de la amilasa: Saliva + Almidón + Benedict. La enzima convierte al
polisacárido en un monosacárido que reduce al reactivo produciendo asi un cambio en la
coloración.
Evidenciar como factores abióticos afectan la actividad enzimática: Saliva + Almidón + TCA
10%. El TCA producirá una variación en el pH, desnaturalizando así a la proteína enzimática
(cambios en la estructura secundaria y terciaria) cambiando sus propiedades, por lo que ya no
actuara y el almidón seguirá como polisacárido sin propiedades reductoras. No habrá cambio
de coloración ni aparición de precipitado.
Todos los ensayos se llevaron a cabo con los mismos procedimientos, calentando las muestras
a 95 grados aprox. durante dos minutos y dejando enfriar a Temperatura Ambiente 20
minutos.
Conclusión. Como se esperaba, la amilasa actuó sobre el almidón rompiendo sus enlaces
dando como resultado final monosacáridos de azúcar que redujeron al reactivo cambiando así
su coloración. Cuando se altero el pH, la proteína se desnaturalizo y dejo de actuar sobre los
polisacáridos, estos no son capaces de reducir al reactivo Benedict y por lo tanto no hubo
cambio de coloración.
De izquierda a derecha: Control Negativo, Control Positivo, Saliva + Almidón + Benedict,
Saliva + Almidón + TCA