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Hibridación y clonación
Equipo 3
Chávez Mejía Felipe
Chávez Monteagudo Salvador Iván
Piñón Garfias Miguel Enrique
Ramírez de Santiago Andrés Isaías
HIBRIDACIÓN
Es la formación de ADN de doble hélice a partir de dos hebras simples
complementarias.
Empleadas para buscar moléculas con secuencias de moléculas
complementarias dentro de compuestos formados de ácidos nucleicos.
Deben estar marcadas para poder localizarse y se aplica en una mezcla
separada por electroforesis. Donde se inserta ADN nuevo con un precursor
marcado y se agrega una señal nueva al extremo de la molécula de ADN
completa.
Las sondas son útiles para:
•
Monitorear cantidad o tamaño de una molécula específica de ADN o
ARN en una población de muchas.
HIBRIDACIÓN POR TRANSFERENCIA SOUTHERN
Permite identificar el tamaño de un fragmento específico que contiene el gen de
ADN buscado.
1. Se toma el ADN seccionado y separado por la electroforesis en gel
2. Se sumerge en solución alcalina para desnaturalizar los fragmentos de
ADN bicatenario
3. Se transfieren a una membrana+ a la que se adhieren
4. Se incuba el ADN unido a la membrana con una sonda de ADN que
contiene una secuencia complementaria del gen buscado.
HIBRIDACIÓN POR TRANSFERENCIA NORTHERN
Permite identificar una molécula de ARNm específica en una población de
ARN. Implica transferir moléculas de ARNm separadas a una membrana con
carga + y exponerlas a una sonda de ADN radiactiva seleccionada.
CLONACIÓN
Proceso por el que se consiguen copias idénticas de un organismo ya
desarrollado, de forma asexual.
Proceso típico de clonación de ADN
Se emplea un vector que aporta información necesaria para propagar el ADN
clonado hacia la célula y un inserto de ADN que se introduce dentro del vector
y presenta el ADN mencionado.
Elemento clave para crear moléculas de ADN recombinante


Uso de enzimas de restricción que cortan el ADN en secuencias
específicas
Enzimas que unen entre sí los fragmentos de ADN seccionados(ADN
ligasa)
Mediante creación de moléculas de ADN recombinantes que pueden
propagarse a un huésped se puede purificar un inserto determinado de ADN y
aislarlo del resto. Además amplificarlo para producir grandes cantidades.
Clonación de ADN en vectores plásmidos.
Segmentado el ADN por una enzima de restricción se inserta en un vector para
su propagación, es decir el fragmento de ADN se inserta en una 2ª molécula de
ADN (el vector) para replicarse en el huésped.
Vectores de ADN típicos tienen 3 características:
1. Origen de replicación que permite replicarse en forma independiente del
cromosoma hospedador.
2. Algún marcador que permite identificar fácilmente células que contienen
el vector.
3. Sitios independientes para unión de una enzima de restricción o varias.
Insertando los fragmentos de ADN en un punto específico dentro de un
vector íntegro.
La inserción de un fragmento de ADN en un vector es un proceso simple.
•
Un vector plasmídico tiene un sitio de reconocimiento exclusivo para
EcoRI, enzima de restricción que dará al plásmido formación lineal.
•
Como EcoRI produce extremos 5´ protruyentes complementarios entre
sí, los extremos adhesivos se aparean y vuelven a formar un círculo con
2 muescas.
•
La enzima ADN ligasa y ATP sella las muescas para volver a formar un
círculo unido en forma covalente.
•
Un segmento específico de DNA evaluado se escinde con una enzima
de restricción para producir posibles insertos de ADN
Vectores de expresión
•
Algunos vectores además del aislamiento y purificación del fragmento
específico del ADN, conducen a la expresión de genes dentro del
inserto.
•
Si la región codificadora del gen (sin su promotor) está en el sitio de
inserción en la orientación apropiada, la célula hospedadora transcribirá
el gen insertado en un ARNm y lo traducirá.
Preguntas
1. Es la formación de ADN de doble hélice a partir de dos hebras
simples complementarias.
a) Mutación
b) Hibridación
c) Corte y empalme
2. Permite identificar el tamaño de un fragmento específico que
contiene el gen de ADN buscado.
a) hibridación por transferencia southern
b) hibridación por transferencia northern
c) transcripción
3. Principal diferencia entre la hibridación por transferencia southern
y la hibridación por transferencia northern.
a) Southern utiliza ADN y ARNm mientras que Northern utiliza solo arn.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
b) Northern utiliza ARN y Southern ADN
c) Southern utiliza un virus y Northern una bacteria
Permite identificar una molécula de ARNm específica en una
población de ARN.
a) hibridación por transferencia southern
b) hibridación por transferencia northern
c) hibridación por transferencia combinada
Son características de clonación excepto:
a) se consiguen copias idénticas de un organismo ya desarrollado
b) es de forma asexual
c) se sumerge en solución alcalina para desnaturalizar los fragmentos
de ADN bicatenario
Aporta la información necesaria para recibir y propagar el ADN
clonado hacia la célula.
a) ADN ligasa
b) Genoteca
c) Vector
Cortan el ADN en secuencias específicas.
a) Enzimas de restricción
b) ADN ligasa
c) Vector
Unen entre sí los fragmentos de ADN seccionados.
a) enzimas de restricción
b) ADN ligasa
c) ADN polimerasa
Vectores que además del aislamiento y purificación del fragmento
específico del ADN, conducen a la expresión de genes dentro del
inserto.
a) VECTORES DE EXPRESIÓN
No tuve ideas pa poner mas opciones jaja. Es ke ya es tarde.