Download Congreso Nacional del XIV Verano de la Investigación Científica del

XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico
OBTENCIÓN DE LA PROTEÍNA RECOMBINANTE LEA MEDIANTE EL SISTEMA
PET28A
King William Cantor Bertín Instituto tecnológico de la Paz, [email protected]. Asesora
María Fabiola León Galván Universidad de Guanajuato, [email protected]
PLANTAMIENTO DEL PROBLEMA
Recientemente ha crecido el interés en los diversos sistemas biológicos que poseen
características esenciales para la protección ante condiciones adversas en el caso de
las plantas nos podemos referir a sequias, condiciones de salinidad extremas, coques
térmicos y demás condiciones que se presentan durante el desarrollo de estos
organismos, mediante diversos mecanismos de defensa estos logran sobrevivir, en esta
ocasión se hace referencia a las proteínas LEA (Late Embryogenesis Abundant).
Al reconocer la actividad de estas proteínas y su obtención se podrá realizar pruebas
sobre su posible utilización en sistemas más complejos.
METODOLOGIA
Mediante la amplificación del gen LEA con ayuda de la técnica de PCR (reacción en
cadena de la polimerasa) y la obtención de células competentes de E. coli DH-5α para
la posterior clonación del gen mediante la ligación al vector Topo TA clonning el cual se
insertó a la célula competente de E. coli DH-5α. Se logró la obtención de cepas con el
plásmido de interés, se verifico mediante la extracción de DNA plasmidico de las cepas
crecidas en placa, logrando amplificar el gen mediante PCR y su confirmación en
electroforesis en gel de agarosa al 1%, una vez confirmada la clonación se realizó la
purificación del DNA plasmidico proveniente de las cepas clonadas para llevar a cabo su
purificación y posterior expresión mediante el sistema recombinante pET 28a en células
de E. coli BL21 pLysS.
CONCLUSIONES GENERALES
El presente proyecto no ha concluido, en este se pretende lograr la expresión de la
proteína en cantidades necesarias para posterior estudio biológico, mediante la ligación
del plásmido al sistema pET 28a en células competentes de E. coli BL21 pLysS y la
expresión de la proteína bajo condiciones favorables para su sobreexpresión.
© Programa Interinstitucional para el Fortalecimiento de la Investigación y el Posgrado del Pacífico
Agosto 2014