Download Graficas Análisis de metilación en pacientes con leucemia mieloide

Tabla 1 Secuencia de primer´s metilados y no metilados de los genes usados
en este estudio.
Gen
Ubicación
Temperatura
cromosómica del Secuencia de los primers
s
gen
alineamiento
amplificado
46.9°C
130pb
OSCP1 FM
Tamaño
de del
Referencia
5´ GGGGTTAGGTAGTTAGTGG 3´
OSCP1RM
5´ GGGACACCGCTGATCGTTTA 3´
1p34.3
OSCP1FU
5´GAGTTGGATTGGTGAAGAGTT 3´
OSCP1RU
5´CCAAACCCCCTTCTAATT 3´
P15 FM
5’TTAGGAAGGAGAGAGTGCGTC 3’
P15 RM
5’TACCCTTATTCTCCTCGCG3’
(15)
50.0 °C
9p21
(18)
P15 FU
5`TTAGGAGGAGAGAGTGTGTT’3
P15 RU
5’TACCCTTATTCTCCTCAC3'
132pb
47.0°C
5’CGCGTTTCGGTTAGGCGGAGACGCGGT
ABL FM
59.2°C
CGC 3’
9q34.1
5’TGTGTTTTGGTTAGGTGGAGATGTGGTT
238pb
(19)
ABL FU
GT 3’
ALB-1 R
5´AAACAACCCCTTCTTAAATTTACAA ´3´
ER FM
5’GATACGGTTTCTATTTTGTTCGC 3’
ER RM
5’ACAAACAATTCAAAAATCCAACT 3’
58.0°C
50.0°C
123pb
6q25.1
(20)
ER FU
5 ‘GGATATGTTTGTATTTTGTTTGT 3’
ER RU
5’ACAAACAATTCAAAAATCCAACT 3’
NPM2 FM
5’AGGAGGAAAGAATGGGAGAAGGG 3’
NPM2 RM
5’CCCCCCACACAACCTTACTAT 3´
53.8°C
121pb
60.0° C
8p21.3
5’GGGACACCGCTGATCGTTTACCCCCCA
208pb
(15)
270pb
(15)
NPM2 FU
CAACCTTACTAT3’
5’AGGTTTTTTAGTTAGGGTTTGGATACT 3’
NPM2 RU
PDLIM4 FM
5´TTTGTGAGTTTGGATTGGT 3´
5q31.1
PDLIM4 RM
52.0°C
53.0°C
5´CCCCAAATAAACCCTCCAT 3´
PDLIM4 FU
5´TTTGTGAGTTTGGATTGGT 3´
PDLIM4 RU
5´GGGACACCGCTGATCGTTTA 3´
F 5´CTGGGGAAAACGATCCAACC 3´
PolA
Xp22.1
57.0°C
359pb
(21)
R 5´CTGAAAGCCAATCAGCGGC 3´
FU : forward no metilado, FM forward Metilado, RU revese no metilado RM reverse metilado, M: Metilado U: No metilado
OSCP1
81%
Genes
p15
67.7%
ABL
82.0%
ER
78.1%
NPM2
96.9%
PDLIM4
0.0%
84.4%
10.0%
20.0%
30.0%
40.0%
50.0%
60.0%
70.0%
80.0%
90.0% 100.0%
Porcentaje de metilación
Figura 1. Porcentaje de pacientes que presenta metilación en cada uno de los
genes evaluados En la figura se muestra los genes estudiados en el eje y, el porcentaje
de metilación en una escala de 10% en el eje x.
Figura 2. Electroforesis representativas de los amplificados de los genes en
los pacientes y en los controles comerciales obtenidos por MS-PCR Amplificados
de los pacientes: Carril 1: Marcador de peso molecular 50pb ThermoSchientific®, 1 y 2
individuos sanos, 3-5 pacientes con LMC: ADN metilado (M), No metilado (U), ADN no
convertido (G), blancos: mezcla de cebadores, Hot-Star Taq polimerasa DNA HS y agua
ultra pura. 1-OSCP1 (130 pb) 2- ABL (238 pb) 3-p15 (132 pb), 4-ER (123 pb M y
121pb U) 5-NPM2 (208 pb), 6- PDLIM4 (270 pb). Para el gen PolA (359 pb) Marcador de
peso molecular 500pb ThermoSchientific®.
120.0%
100.0%
% de pacientes
80.0%
60.0%
40.0%
Crónica
20.0%
Acelerada
0.0%
U
M
OSCP1
U
M
P15
U
M
U
ABL
Genes
M
ER
U
M
U
M
NPM2 PDLIM4
Figura 3. Frecuencia de pacientes con genes metilados con relación a la fase
de la LMC En la figura se observa el porcentaje de pacientes con genes metilados o no
metilados de acuerdo a la fase de la enfermedad. Las barras azules representan los
que se encuentran en fase crónica y las verdes en fase acelerada. U: sin metilar y M:
metilados
120.0%
100.0%
80.0%
60.0%
40.0%
20.0%
0.0%
U
M
U
OSCP1
M
U
P15
M
U
ABL
Crónica
M
U
ER
M
U
NPM2
M
PDLIM4
Acelerada
Figura 4 . Metilación respecto al tratamiento con Hidroxiurea y la fase de la
enfermedad. En la figura se observa el porcentaje de pacientes con genes metilados
o no metilados en los que reciben como tratamiento Hidroxiurea, de acuerdo a la fase
de la enfermedad. Las barras azules representan los que se encuentran en fase crónica
y las verdes en fase acelerada. U: sin metilar y M: metilados
120.0%
100.0%
80.0%
60.0%
40.0%
20.0%
0.0%
U
M
OSCP1
U
M
P15
U
M
ABL
Crónica
U
M
ER
U
M
NPM2
U
M
PDLIM4
Acelerada
Figura 5. Metilación respecto al tratamiento con ITK´s. En la figura se observa
el porcentaje de pacientes con genes metilados o no metilados en los que reciben
como tratamiento ITK´s, de acuerdo a la fase de la enfermedad. Las barras azules
representan los que se encuentran en fase crónica y las verdes en fase acelerada. U:
sin metilar y M: metilados.
120%
% de pacientes
100%
80%
60%
40%
20%
0%
U
M
OSCP1
U
M
P15
U
M
ABL
Resistencia
U
M
ER
U
M
NPM2
U
M
PDLIM4
No resistencia
Figura 6. Metilación según la resistencia a los ITK´s. En la figura se observa el
porcentaje de pacientes de acuerdo a la metilación de los genes estudiados según si
ha desarrollado resistencia o no. Las barras verdes representan las que han
presentado resistencia y los que no en barras azules. U: No metilado, M: metilado