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EJERCICIO 1.- La enzima Glicerol-3 fosfato deshidrogenasa se inactiva irreversiblemente en presencia de ciclohehanediona con una cinética aparente de primer orden. Sin embargo, cuando se varía la concentración del agente inactivante en la cubeta se observa que la cinética se modifica. Explique este resultado calcule el valor real de la constante de velocidad de la reacción. [CHD] (mM) 0.2 1 t (min) Enzima activa remanente (%) 0 100.0 100.0 10 92.2 77.8 20 93.9 56.8 30 88.4 46.3 40 76.2 36.6 60 72.1 20.4 90 60.8 9.1 120 54.6 4.3 Sugerencias: a)Demuestre que la cinética de inactivación es de primer orden aparente y calcular la constante de primer orden y la vida media (no olvide las unidades). b)Determine si la constante de primer orden varía con la concentración del reactante CHD y escriba una expresión para la velocidad que incluya a todos los reactantes. c) A partir de esta ecuación identifique que es lo que varía en cada experimento y lo que se mantiene constante y diga porque la cinética aparece como si fuese de primer orden. EJERCICIO 2. Considere a la enzima Invertasa, que cataliza la hidrólisis de Sacarosa a fructosa y glucosa. Esta enzima posee una Km para sacarosa de 0.5 mM y una constante catalítica de 175 min-1. Si se mide su actividad en presencia de 0.25 mM de sacarosa con 25 pmol de enzima en la cubeta - ¿qué velocidad de catálisis se observará? - ¿qué fracción representa esto de la Vmax que se podría calcular en esta reacción si se variase la cantidad de sacarosa? - ¿Cuánto sustrato habría que añadir para que la velocidad observada alcanzase 0.95% de la Vmax? - ¿Qué importancia podría tener esto para la posible aplicación industrial de la enzima? - Explique sus respuestas. EJERCICIO 3. La actividad de la Acetil-CoA carboxilasa, medida con tres diferentes concentraciones de enzima y a diferentes concentraciones de sustrato fué la siguiente: [Enz] (g proteína) de 0.1 [AcetilCoA] (M) 0.2 0.5 Vel (mol / min) 0.05 0.275 0.546 1.373 0.14 0.482 1.001 2.502 0.23 0.580 1.185 2.891 0.32 0.642 1.385 3.463 0.50 0.755 1.494 3.656 0.59 0.766 1.497 3.810 a) Calcular para cada experimento el valor de Km y el valor de Vmax. b) ¿Son los valores de Km y Vmax iguales o diferentes? c) Explique si lo que observó es lo que esperaba obtener d) Sabiendo que la enzima pesa 220 000 grs/mol, haga una gráfica de Vmax vs mol de enzima. e) ¿Qué represnta la pendiente de esta gráfica? f) ¿En qué se parece el valor anterior a la Actividad específica = Vmax/mg de proteína en mol min-1 mg de enzima-1? g) ¿Qué pasa con la medida de actividad específica cuando la enzima no está pura?