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Ensayo para hormonas Libres Existen varias hormonas que se encuentran asociadas a proteínas especificas y ligeramente asociadas a la albumina. Usualmente, solo la hormona libre se encuentra biológicamente activa. Los ensayos para hormonas libres tienen dos aplicaciones clínicas, se utiliza cuantificar las concentraciones de las hormonas tiroideas y las hormonas esteroideas. Normalmente, se utilizan las siguientes técnicas para estimar las concentraciones séricas libres de las hormonas. 1. Índice Indirecto Los índices indirectos toman en cuenta dos medidas: una para la concentración total de la hormona y otra para la Globulina fijadora de tiroxina (TBG). 2. Ensayo de dos pasos En este ensayo, el suero es inicialmente incubado con una pequeña cantidad de Anticuerpo específico para T4 inmóvil, el cual fija una cantidad de t4 de la muestra, sin interrumpir el equilibrio inicial del suero. Una vez obtenido un equilibrio, el suero y los anticuerpos son separados. Los anticuerpos inmóviles ligados a T4 son lavados varias veces para eliminar residuos del suero. Luego la muestra se incuba con un derivado de T4 marcado y se cuantifican los sitios de los anticuerpos fijados como en un ensayo típico. 3. Ensayo de un paso En este ensayo, el T4 (T3) marcado compitiendo por el anticuerpo fijador se remplaza por un análogo de T4(T3) modificado químicamente, el cual tiene la propiedad de fijar fácilmente al anticuerpo especifico de T4 (T3), pero con menos facilidad de la hormona natural de fijarse a las proteínas fijadores séricas. El propósito de este ensayo es mejorar la imprecisión del ensayo de dos pasos, pero manteniendo la validad.