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“CLONACIÓN DE FRAGMENTOS PERTENECIENTES AL GEN QUE CODIFICA LA ALBÚMINA 2S EN Glycine max” Ana María Nava-Cabrera1, Flor de Fátima Rosas-Cárdenas2 y Silvia Luna-Suárez1 1,2Centro de Investigación en Biotecnología Aplicada-IPN Ex-Hacienda San Juan Molino, Carretera Estatal TecuexcomacTepetitla Km 1.5, Tlaxcala C.P. 90700, México [email protected] Palabras clave: Albúmina 2S, Glycine max, lunasina Introducción Se sugiere que el consumo de alimentos ricos en soya puede contribuir a disminuir el índice de cáncer de mama, próstata y colon en ciudades como China y Japón. La proteína Albúmina 2S de soya está conformada por un péptido señal, una subunidad grande y una subunidad pequeña siendo esta última de amplio interés debido a que contiene al péptido lunasina de 43 aminoácidos que presenta un sitio de adhesión celular justo antes de una cola de 8 aspartatos presentes en su C-terminal Galvez col. (1999). La cola de poli-aspartatos al ser expresado en E. coli se observa que interrumpe la formación del septo bacteriano, este hecho y su presencia en semilla llevó a investigar el efecto en líneas celulares cancerígenas obteniendo interrupción de la mitosis, seguido de muerte celular Galvez col. (1999). La importancia de este trabajo fue la construcción de fragmentos que codifican para la proteína Albúmina 2S de soya para su posterior expresión en E. coli. Metodología Se extrajo DNA genómico de soya, se diseñaron oligos para amplificar los diferentes fragmentos pertenecientes a la albúmina 2S, dichos fragmentos se insertaron en el vector de clonación pJET1.2/blunt y se transformaron células E.coli TOP10, se verificó la dirección de los fragmentos por PCR, digestión y secuenciación. Se hizo la inserción en el vector de expresión para E. coli pET32b+ y se transformó en la cepa de E. coli BL21 RIL. Resultados y Discusión El diseño de los oligos fue para la obtención de las diferentes partes del gen que codifican para Albúmina 2S que incluyen péptido señal, subunidades chica y subunidad grande, se observó que el porcentaje de transformantes obtenidas positiva a los fragmentos en el vector de clonación pJET1.2/blunt fue del 40%, y el porcentaje de direccionalidad fue del 30 %, el cual fue verificado por PCR, restricción y secuenciación. De igual manera el porcentaje de transformantes positivas al fragmento de interés en el vector de expresión pET32b+ fue del 40% y el porcentaje de transformantes positivas a direccionalidad fue del 15%. Fig. 1. Fragmento perteneciente a péptido señal unida a subunidad chica y subunidad grande (485 pb) clonado en pJET (3459 pb), se verifica su inserción por PCR. Fig. 2. Subclonación del fragmento Péptido señal, subunidad pequeña y subunidad grande en vector de expresión pET32b+ (6417 pb). Por medio de PCR se puede observar la presencia del fragmento dentro del vector de expresión (483pb). Conclusiones Con las construcciones obtenidas se podrá observar si la función de los diferentes fragmentos que codifican para Albúmina 2S es similar a la reportada en el péptido lunasina en E. coli, permitiendo determinar si los diferentes fragmentos de la albúmina 2S participan en la interrupción de la formación del septo bacteriano. Referencias Galvez, A. F., & Benito, O. (1999). A soybean cDNA encoding a chromatin-binding peptide inhibits mitosis of mammalian cells. Nature Biotechnology,17(5), 495-500. Erickson, H. P. (1997). FtsZ, a tubulin homologue in prokaryote cell division.Trends in cell biology, 7(9), 362-367. .
