Download Situación y control de Escherichia coli verocitotoxigénico (VTEC)

5º Congreso Argentino de Nefrología Pediátrica 3º Jornadas de Enfermería y de Técnicos en Nefrología Pediátrica 21, 22 y 23 de Junio de 2012 S e d e : Centro de Docencia y Capacitación Pediátrica Dr. Carlos A. Gianantonio Ciudad de Buenos Aires _____________________________________________________________________________________________ Simposio: Síndrome Urémico Hemolítico Tema: Situación y control de Escherichia coli verocitotoxigénico (VTEC) en bovinos. Uso de probióticos Autor: Dra. Analía Inés Etcheverría Fecha: Jueves 21 de junio Escherichia coli verocitotoxigénico (VTEC), agente causal del Síndrome Urémico Hemolítico en niños, se encuentra ampliamente distribuido en la población bovina, siendo el bovino el principal reservorio de la bacteria. La característica fundamental de VTEC es su capacidad de producir verocitotoxinas (VT1 y VT2). Se han identificado además otros factores de virulencia como una proteína denominada intimina, responsable de la lesión de adherencia y borrado del enterocito (A/E), y un plásmido de 60 MDa (Mp) que presenta una gran variabilidad genética y codifica entre otros factores, una hemolisina enterohemorrágica (EhxA), una serinproteasa (EspP), una proteína autoaglutinante (Saa) que participaría en la adherencia de cepas eae‐, una proteína Sab que participaría en la adherencia y la formación de biofilms, porta también genes toxB, katP, subA, genes para el pili Tipo IV. Existen otros factores de adherencia que no se detectan rutinariamente en las cepas VTEC: Iha (proteína de membrana externa) y Efa‐1 (factor de adherencia de EHEC (E. coli enterohemorrágico) que participan en la colonización del intestino de bovinos. Se ha demostrado que el principal sitio de colonización es la unión recto‐anal. El éxito de la colonización del bovino por VTEC y la aparente resistencia a la enfermedad sistémica son, en la actualidad, motivo de muchos estudios. Las causas de esta naturaleza refractaria podrían corresponderse con la ausencia del receptor (Gb3) de las VTs en la mayoría de los tejidos de estos animales. Sin embargo, otros estudios demuestran que los bovinos expresan receptores para VTs pero en tejidos diferentes y con una nueva distribución celular. Los factores que incrementan el éxito de VTEC para colonizar el intestino del bovino, incrementan en consecuencia el riesgo para la salud humana. Muchos estudios a nivel mundial se focalizan en E. coli O157:H7, pero en nuestro país el 30% de los casos de SUH son producidos por serotipos no‐O157, portadores de distintos factores de virulencia. La mayoría de los casos de infección en el hombre se produce por ingestión de alimentos (67%) y agua (10%) contaminados, aunque se ha informado también la transmisión persona‐persona, y por contacto directo con animales o bien por exposición al medio ambiente contaminado. La dosis infectiva es muy baja, la enfermedad puede producirse con sólo 100 bacterias. Estudios realizados en Argentina han corroborado que el bovino es reservorio de VTEC. Se determinó que la prevalencia de VTEC en bovinos en pastoreo y en matadero fue del 32,8%. Los terneros fueron portadores de los serotipos de mayor virulencia para el hombre, mientras que en bovinos adultos en pastoreo y en matadero se encontraron serotipos compartidos con alimentos cárnicos. En bovinos de feedlot la prevalencia de VTEC fue del 62,7% a través de 11 muestreos consecutivos. E. coli O157 se detectó en el 28,54% del total de establecimientos muestreados y se aisló del 6,7% de los animales muestreados en forma seriada y del 0,17% de los muestreados por única vez confirmando la eliminación intermitente. En tambo se detectó una prevalencia del 37,5% y 43% en vacas y terneros, respectivamente, donde el gen vt2 fue el detectado con mayor frecuencia. Cuando se estudió el medio ambiente de tambo como fuente de contaminación se encontró una prevalencia de VTEC del 23 % siendo también vt2 el gen que más se detectó. La situación planteada hace necesario encontrar estrategias de intervención en el bovino para controlar la colonización por VTEC en esta especie animal. En nuestro país, algunos estudios se han dirigido al diseño de una vacuna a partir de dos proteínas recombinantes de VTEC O157:H7: un fragmento carboxilo‐terminal de la intimina y EspB mientras que en nuestro grupo trabajamos en el control de la colonización del bovino por medio del uso de bacterias probióticas. Aislamos, a partir de colon bovino, bacterias potencialmente probióticas con actividad inhibitoria, in vitro, contra VTEC O157:H7 y no‐
O157.Caracterizamos dichos aislamientos para demostrar que cumplieran con las condiciones que debe reunir un microorganismo para ser considerado probiótico. Comprobamos que las bacterias seleccionadas pertenecían a la especie Escherichia coli pero que no presentaron ningún factor de virulencia cuando fueron estudiadas por PCR y que la inhibición de crecimiento de la cepa patógena era debida a la producción de colicinas. Comprobamos que las bacterias colicinogénicas seleccionadas fueron sensibles a los antibióticos utilizados y que sobrevivieron en medios ácidos y en medios con sales biliares, condiciones requeridas para ser consideradas como probióticos. Al estudiar la cinética de inhibición del crecimiento de E. coli O157:H7 por la acción de las bacterias seleccionadas en cultivos simultáneos, comprobamos que a las 48 h de cultivo ya no era posible detectar E. coli O157:H7 en los cultivos. Las cepas probióticas inhibieron la adherencia a cultivos de células HEp‐2 como así también la adherencia a explantos de DIRECCIÓN DE CONGRESOS Y EVENTOS |SOCIEDAD ARGENTINA DE PEDIATRÍA |© 2009 5º Congreso Argentino de Nefrología Pediátrica 3º Jornadas de Enfermería y de Técnicos en Nefrología Pediátrica 21, 22 y 23 de Junio de 2012 S e d e : Centro de Docencia y Capacitación Pediátrica Dr. Carlos A. Gianantonio Ciudad de Buenos Aires _____________________________________________________________________________________________ colon de bovinos. Realizamos la inoculación de terneros por vía oral con E. coli O157:H7 y E. coli productoras de colicinas y comprobamos que en los animales que recibieron ambos tipos de bacterias no fue posible recuperar E. coli O157:H7 más allá del día 20. En cambio, los animales que recibieron E. coli O157:H7 solamente, eliminaron estos patógenos durante 170 días. Cuando analizamos muestras de colon de los bovinos inoculados observamos que en los animales que habían recibido ambas clases de bacterias se detectaron muy pocas E. coli O157:H7 adheridas al epitelio colónico contrastando con una cantidad mucho mayor de bacterias adheridas en los animales inoculados con la cepa patógena solamente. Estos resultados demuestran que las bacterias seleccionadas fueron capaces de reducir la colonización de los bovinos con E. coli O157:H7. DIRECCIÓN DE CONGRESOS Y EVENTOS |SOCIEDAD ARGENTINA DE PEDIATRÍA |© 2009